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目的:创伤后应激障碍(post-traumatic-stress-disorder,PTSD)是指由于环境灾害事件、恐怖活动事件、各种意外事故等导致延迟出现和长期持续的精神障碍。近年来,随着国内外各种突发性灾难事件的增多,PTSD发病率呈逐年上升趋势,已成为灾难后创伤造成的严重心理障碍及首要公共注目的问题。PTSD临床症状主要表现为恐惧记忆异常,即对创伤事件的病理性重现,称为“闪回”。PTSD患者可能表现出异常巩固和创伤性记忆的恢复,导致创伤性重现。海马和杏仁核参与恐惧记忆的通路,并在调节与恐惧相关的情绪中发挥着关键作用。RIN1基因(Ras interaction/interference1,RIN1)是Ras蛋白的效应因子,在海马和杏仁核等高表达。RIN1位于神经细胞的胞体和突起,RIN1在胎儿期大脑中表达较高,但出生后表达降低,提示RIN1只与成熟神经元有关。RIN1通过结合下游的Rab5和激活下游的ABL正向调控细胞内吞作用和细胞骨架的重建,同时通过调节EphA4的内吞作用,调节恐惧记忆。本课题组前期研究发现单一连续刺激(single prolonged stress,SPS)引起恐惧记忆异常,海马和杏仁核形态和功能异常。但是PTSD引起恐惧记忆异常的机制还未清楚。本研究以RIN1作为切入点,利用PTSD动物模型研究PTSD是否引起海马和杏仁核RIN1的表达变化。同时利用RIN1敲除大鼠(RIN1-/-)模型研究RIN1调节恐惧记忆的具体分子机制。从而证明RIN1是否参与调节PTSD引起的恐惧记忆增强,也为寻找潜在的有效治疗PTSD的药物靶点提供新的思路。方法:应用单一连续刺激方法构建PTSD动物模型。用条件恐惧箱实验(Conditional Fear Box)检测control大鼠,SPS大鼠,Wild大鼠及RIN1-/-大鼠的恐惧记忆及正常大鼠和SPS在足底电击前后的恐惧记忆差异。应用Western blot方法检测control大鼠,SPS大鼠,Wild大鼠及RIN1-/-大鼠海马及杏仁核RIN1及其通路ABL1/2、Rab5的表达变化,以及AMPAR、Caspase7、Caspase9、Caspase12等表达变化差异。同时应用免疫荧光标记法和免疫荧光双标方法检测control大鼠,SPS大鼠,wild大鼠及RIN1-/-大鼠海马及杏仁核RIN1及AMPAR的细胞内分布及免疫反应性。应用PCR方法检测Wild大鼠和RIN-/-1大鼠海马RIN1及其通路下游ABL1/2、Rab5的mRNA的表达变化。应用TUNEL法检测Wild大鼠和RIN1-/-大鼠海马细胞凋亡情况。结果:1.条件恐惧箱实验结果显示SPS组大鼠与control组大鼠相比较,SPS组大鼠恐惧记忆显著增强。2.Western blot方法检测大鼠海马RIN1蛋白表达结果显示,SPS组大鼠与control组大鼠相比RIN1显著增加,且大鼠杏仁核RIN1蛋白表达结果与海马RIN1蛋白表达结果基本一致。3.免疫荧光结果显示在大鼠海马中,RIN1表达在神经元中,SPS组与control组比较,RIN1免疫反应增强。4.RIN1-/-组大鼠与Wild组大鼠相比,RIN1-/-组大鼠恐惧记忆减退。5.运用Western blot,免疫荧光及real-time PCR方法发现与Wild组大鼠相比,RIN1-/-组大鼠海马RIN1及下游ABL1/2、Rab5在蛋白水平,免疫反应性及mRNA水平显著降低。6.采用TUNEL法检测海马细胞凋亡情况,RIN1-/-组大鼠海马细胞总数少于Wild组大鼠,RIN1-/-组大鼠TUNEL阳性细胞百分比明显高于Wild组大鼠。且RIN1-/-组海马Caspase7与Caspase9蛋白水平明显升高,但是Caspase12蛋白水平没有显著变化。7.免疫荧光及Western blot结果显示RIN1-/-大鼠与Wild大鼠相比,海马神经细胞细胞质内的AMPAR明显减少,但是细胞膜上的AMPAR未见显著变化。结论:1.SPS大鼠恐惧记忆增强可能与海马和杏仁核中RIN1表达水平增高有关。2.RIN1调节恐惧记忆可能通过线粒体途径介导的细胞凋亡和细胞质内的AMPAR表达降低实现的。