【摘 要】
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茶叶是我国传统饮品,千百年来随着茶树品种的不断丰富以及制茶技术的不断发展,茶叶产品种类日渐庞杂,不同群体对茶叶功能的需求也日渐细化。面对当下茶资源过盛,以及不同群体对茶叶功能需求日益上升的形势,建立一种快速客观的茶叶功能评价方式是推动茶叶深加工技术精准发展的必要手段。茶叶功能以及风味色泽主要取决于水提物中所含活性成分。而现有的茶叶功能评价与功能预测方式主要以仪器检测或动物实验为主,存在操作难度高,
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茶叶是我国传统饮品,千百年来随着茶树品种的不断丰富以及制茶技术的不断发展,茶叶产品种类日渐庞杂,不同群体对茶叶功能的需求也日渐细化。面对当下茶资源过盛,以及不同群体对茶叶功能需求日益上升的形势,建立一种快速客观的茶叶功能评价方式是推动茶叶深加工技术精准发展的必要手段。茶叶功能以及风味色泽主要取决于水提物中所含活性成分。而现有的茶叶功能评价与功能预测方式主要以仪器检测或动物实验为主,存在操作难度高,结果分析难等缺陷,难以满足对大量涌现的新品种茶叶进行活性成分分析的市场诉求。本实验以酵母缺失体文库为背景,通过高通量筛选,确定对绿茶、红茶、霜前白茶、霜后白茶四种茶叶水提物敏感的340株酵母缺失体,其中65株酵母缺失体对四种茶叶水提物都敏感。将四种茶叶水提物共性的敏感缺失体对应基因进行GO富集分析发现,它们主要富集到肌动蛋白骨架组装、细胞内吞作用、营养物质的运输等途径,总结这些通路所含基因对应的缺失体,由于精力所限,选择其中12株缺失体进行后续的实验。这12株缺失体所缺失的酵母基因分别构成Arp2/3复合体和TORC2复合体在富集分析中呈现的富集倍数均处于较高水平。通过基因同源性比对确定人类细胞中与选定的12株缺失体对应酵母基因同源性较高的人类基因。通过确定基因功能以及文献检索发现这些人类基因与癌细胞浸润、侵袭以及运动能力有关,也有研究证明茶叶中所含的活性物质:茶多酚、L-茶氨酸、表儿茶素、表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate,EGCG)具有抑制癌细胞扩散的能力。所以,本实验通过在培养基中添加三梯度浓度的茶多酚、L-茶氨酸、表儿茶素、EGCG,观察酵母缺失体在这些特殊培养基中的生长状况,对化合物浓度与酵母缺失体生长量之间的关系进行定性和定量的检测,试图建立一种新的茶叶活性成分功能评价方式。实验通过固体培养和液体培养两种形式观察培养环境中茶多酚、L-茶氨酸、表儿茶素、EGCG四种活性成分浓度与12株酵母缺失体生长表型之间的关系,建立基于酵母缺失体文库对茶叶活性成分功能进行定性评价和定量评价的方法。实验结果表明,培养环境中的茶多酚含量与缺失体ARP2?、ARC15?、ARC40?、ARC19?、TOR2?、KOG1?、LST8?、GTR1?、TSC11?的生长表型呈负相关;培养环境中的表儿茶素含量与缺失体ARC40?、ARC19?的生长表型呈负相关;培养环境中的EGCG含量与缺失体ARC40?、ARC19?、KOG1?、TSC11?的生长表型呈负相关;培养环境中的L-茶氨酸含量与缺失体ARP2?、ARC15?、ARC40?、ARC19?、TOR2?、KOG1?、LST8?、GTR1?、TSC11?的生长表型呈负相关。综上所述,酵母缺失体ARP2?、ARC15?、ARC40?、ARC19?、TOR2?、KOG1?、LST8?、GTR1?、TSC11?能够对茶叶所含活性成分茶多酚、L-茶氨酸、表儿茶素、EGCG的功能进行评价。
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