论文部分内容阅读
孢子粉灵芝粉剂是以灵芝孢子粉和灵芝提取物为原料,灵芝子实体经过水提过滤、浓缩、喷雾干燥、混合等工艺制成的散剂,具有增强免疫力功能。本论文建立了多糖肽、灵芝酸及核苷类成分的含量测定方法,并对灵芝多糖类的检测方法做了改进,其中建立的灵芝多糖肽含量测定方法目前国内外尚未见相关报道,同时对产品的安全性及增强免疫力功能进行了研究,为含灵芝提取物及其孢子粉类保健食品的质量控制提供实验参考依据,也为该类产品的开发利用奠定基础。其主要内容包括以下两个方面：一孢子粉灵芝粉剂活性成分含量测定的研究目的：建立孢子粉灵芝粉剂中灵芝多糖类、灵芝酸、核苷类成分的含量测定方法。方法：采用紫外-可见分光光度法,用改良苯酚-硫酸显色法在485nm处测定吸光度值从而测定葡聚糖含量；以水为溶剂60℃水浴30min,用乙醇沉淀离心后,流动相定容,以TSK4000pw (7.8mm x30cm)为色谱柱,甲醇：水=20：80为流动相,流速为1mL/min,柱温：35℃,进样量：10μL, ELSD检测器条件：漂移管温度：55℃,喷雾器为加热模式,气体压力：45psi, HPLC-ELSD法测定多糖肽含量；以氯仿为溶剂回流提取3次,每次1h,过滤得提取液,滤液挥干用甲醇溶解,Agilent C18(4.5x150mm,5μm)为色谱柱,乙腈：1%乙酸水=37：63为流动相,258nm为检测波长,HPLC-PDA法同时测定灵芝酸A、C2含量；以水为溶剂超声提取60rmin,用Symmetry C18(2.1x150mm,3.5μm)为色谱柱,甲醇-0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱,UPLC-MS-MS对胞嘧啶、尿嘧啶、肌苷、鸟苷、腺苷5种核苷类成分进行定性分析,且用Ultimate? AQ-C18(4.6x250mm,5μm)为色谱柱,甲醇-0.01mol/L乙酸钠溶液为流动相梯度洗脱,260nm为检测波长,HPLC-PDA法同时测定5种核苷类成分的含量。结果：孢子粉灵芝粉剂中葡聚糖r为0.993,平均加标回收率95.22%；多糖肽r为0.999,平均加标回收率为99.02%；灵芝酸成分r为0.990～0.992,平均加样回收率为98.30-99.76%；核苷类成分r为0.993-0.999,平均加样回收率为98.46～99.39%。结论：本论文建立的方法适用于孢子粉灵芝粉剂中灵芝葡聚糖、多糖肽、灵芝酸类及核苷类成分含量的测定,方法操作简单、选择性强、重复性好、回收率高。二孢子粉灵芝粉剂增强免疫力功能实验研究目的：对孢子粉灵芝粉剂的增强免疫力保健功能实验进行研究。方法：通过动物实验,运用保健食品功能成分评价技术,先对孢子粉灵芝粉剂安全毒理学进行评价再进一步对其增强免疫力功能实验进行研究。结果：各剂量组小鼠体重、胸腺指数、脾指数、DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应、小鼠碳廓清能力、小鼠NK细胞活性均无统计学意义;样品中、高剂量组ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力明显增强；样品中、高剂量组均能升高血清溶血素水平,并能明显促进小鼠抗体生成；样品高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率、吞噬指数明显升高。结论：根据《保健食品检验与评价技术规范》(卫生部2003版)判定标准,提示孢子粉灵芝粉剂具有增强免疫力功能。