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目的:复方中药芪蓝制剂由黄芪、绞股蓝、川芎和富硒绿茶配方而成,具有“健脾益气、活血祛瘀、解毒止痛”之功效,可用于口腔某些疾病的防治。本研究采用芪蓝制剂体外作用于人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞,通过观察芪蓝制剂对其增殖、细胞周期分布及凋亡等生物学行为的作用效应,并探究其作用效应与micro RNA-21(mi R-21)及其靶蛋白PTEN和PDCD4的关系。方法:以体外培养人舌鳞癌系Tca8113细胞为模型,用1.56~25mg/m L梯度浓度芪蓝制剂处理Tca8113细胞12 h、24 h、48 h,以等体积不含芪蓝制剂的基础培养基处理相同时间为空白对照组,cell counting kit-8(CCK8)法检测细胞活力改变,流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率,特异性茎环状引物结合Taqman探针实时荧光定量PCR法检测mi R-21的相对表达量变化,以Western blot检测PDCD4和PTEN蛋白的相对表达量变化。Lipofectamine®3000瞬时转染mi R-21 mimic使Tca8113细胞过表达mi R-21,芪蓝制剂继续处理24 h后,应用相同的方法检测细胞活力、细胞周期分布和细胞凋亡率,以及mi R-21和PDCD4蛋白的相对表达量。结果:1.芪蓝制剂作用于Tca8113细胞后,CCK-8法结果显示与空白对照组相比,1.56~25mg/m L范围浓度药物对其细胞活性均有抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性,12h、24h及48h的IC50分别为8.800 mg/m L、6.131 mg/m L、3.628 mg/m L,其体外增殖抑制作用随干预时间的延长逐渐增强;2.与空白对照组相比,不同浓度芪蓝制剂作用于Tca8113细胞12h或24h后,S期细胞比例显著升高(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著下降(P<0.05),G2/M期细胞比例无明显变化(P>0.05);3.与空白对照组(4.71±1.65%)相比,3.12~25 mg/m L范围浓度芪蓝制剂作用于Tca8113细胞24h后,出现明显凋亡细胞群(15.04±1.67%至69.74±4.63%,P<0.05);4.与空白对照组相比,3.12~25 mg/m L范围浓度芪蓝制剂作用Tca8113细胞24h后,mi R-21的相对表达量显著下调(P<0.05);5.与空白对照组相比,不同浓度芪蓝制剂作用Tca8113细胞24h后,均明显上调PDCD4和PTEN蛋白的相对表达量(P<0.05),且在6.25mg/m L浓度下,PDCD4表达量最高(2.48±0.12倍),在12.5 mg/m L浓度下,PTEN表达量最高(1.51±0.06倍);6.设置不同比例的Lipofectamine®3000试剂与FAM-NC RNA用量,瞬时转染24h后,利用流式细胞仪检测各组细胞带绿色荧光的比例及其平均荧光强度,结果显示在Lipofectamine®3000:FAM-NC RNA=4.5μL:60n M比例下转染效率最高;7.利用Lipofectamine®3000瞬时转染mi R-21 mimic,构建mi R-21过表达Tca8113细胞模型,再应用6.25mg/m L芪蓝制剂处理24h,q RT-PCR结果显示mi R-21+Qilan组中mi R-21的表达量相对于NC RNA和NC RNA+Qilan组分别上调14倍和30倍(P<0.05);CCK-8实验和流式细胞仪检测结果显示过表达mi R-21部分降低芪蓝制剂的抗增殖和促凋亡效应,与NC RNA+Qilan组(55.75±3.63%)相比,mi R-21+Qilan组细胞活性增至71.08±8.72%,但仍低于NC RNA组(97.83±5.63%,P<0.05),而细胞凋亡率从NC RNA+Qilan组的22.72±1.52%降至13.27±0.44%,但仍高于NC RNA组(P<0.05);与之相似,Western blot结果显示mi R-21+Qilan组PDCD4的表达量介于NC RNA+Qilan组和NC RNA组之间(P<0.05);相反地,流式细胞仪检测结果显示过表达mi R-21对芪蓝制剂的S期周期阻滞效应无明显影响(P>0.05)。结论:1.芪蓝制剂对人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞发挥抗增殖和促凋亡作用;2.芪蓝制剂对人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞发挥S期周期阻滞作用;3.芪蓝制剂下调mi R-21的表达,并上调其靶蛋白PDCD4和PTEN的表达;4.芪蓝制剂通过mi R-21/PDCD4通路发挥对人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞的抗增殖和促凋亡作用;5.mi R-21/PDCD4通路可能不参与芪蓝制剂对人舌鳞癌细胞系Tca8113细胞的S期周期阻滞作用。