【摘 要】
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目的:冠状动脉搭桥术（Coronary artery bypass graft,CABG）和经皮冠状动脉介入术（Percutaneous coronary intervention,PCI）是治疗冠心病患者的主要手段。虽然术后能改善血管通畅性,但都面临术后近期和远期血管再狭窄的问题。血管再狭窄主要由于血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）表型转化所致,即
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目的:冠状动脉搭桥术（Coronary artery bypass graft,CABG）和经皮冠状动脉介入术（Percutaneous coronary intervention,PCI）是治疗冠心病患者的主要手段。虽然术后能改善血管通畅性,但都面临术后近期和远期血管再狭窄的问题。血管再狭窄主要由于血管平滑肌细胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）表型转化所致,即由静止的收缩型转化为增生和迁移活跃的合成型细胞,研究发现这与VSMC糖代谢方式转化有一定的关系。己糖激酶（Hexokinase,HK）是催化糖酵解的关键酶,而其中一个亚型HK2被我们证实在平滑肌异常增殖状态下特异性表达。目前尚不清楚HK2如何调节受损血管的平滑肌细胞表型转化,并且当前对于通过调节平滑肌细胞代谢方式而调控其功能的研究较少。所以本文旨在评估抑制HK2的表达对血管损伤后内膜增生的影响,并探究HK2在VSMC迁移和增殖中的可能机制。方法:体外实验中,用小鼠主动脉平滑肌细胞（Mouse aortic vascular smooth muscle cells,MOVAS）和人的原代主动脉平滑肌细胞（Human aortic vascular smooth muscle cells,HAVSMCs）在含有不同血清浓度培养基条件下分别培养,建立血清刺激细胞表型转化模型。模型建立成功后,使用慢病毒敲除平滑肌细胞的HK2表达或者使用HK2特异性抑制剂3-溴丙酮酸（3-Bromopyruvate,3-Br PA）处理平滑肌细胞。借助Ed U（5-ethynyl-2’-deoxyuridine,5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷）、CFSE（Carboxyfluorescein Succinimidyl Ester,羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂）、Western blot、Real-time PCR、Transwell等方法检测抑制HK2后的细胞增殖、迁移的变化。通过流式细胞术分析细胞周期。并通过乳酸试剂盒检测平滑肌细胞糖酵解水平。体内实验中,用导丝损伤SD大鼠颈动脉,建立颈动脉损伤模型。通过H＆E染色以及免疫组化观察注射3-Br PA对颈动脉损伤的影响;通过乳酸试剂盒检测血清中乳酸含量。各项数据使用Graphpad Prism进行统计分析及作图,P＜0.05视为两样本间差异有统计学意义。结果:VSMC被10%胎牛血清激活后HK2表达增加,糖酵解功能增强,细胞增殖能力增强。HK2被抑制后可以有效抑制平滑肌细胞增殖和迁移,降低细胞增殖抗原（Proliferating cell nuclear antigen,PCNA）和磷酸化组蛋白H3（Prospho-Histone H3,p-H3）表达,减少细胞培养基中乳酸含量。并且发现VSMC增殖是被抑制在G2期。最后证实了HK2是通过Akt/m TOR通路发挥其功能。在体内实验中,对于同批次SD大鼠,相比于对照组,H＆E染色发现实验组内膜增生较少,免疫组化染色发现HK2,PCNA表达减少。动物血清乳酸检测发现,实验组乳酸生成减少。结论:（1）本文验证了VSMC在HK2被抑制后,继而抑制Akt/m TOR通路,有氧糖酵解能力下降,乳酸减少,VSMC增殖、迁移减弱。（2）在颈动脉损伤模型中,3-Br PA有效地减轻颈动脉损伤后的内膜增生并且抑制了内膜细胞中相关增殖指标的表达。
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