胡镜清应用五苓散治疗老年期痴呆辨证要点及其作用机制研究

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研究目的:基于网络药理学的方法研究五苓散治疗老年期痴呆的潜在活性成分及相关通路,进一步揭示其作用机制,为五苓散治疗老年期痴呆提供理论依据。研究方法:(1)通过收集2019年9月至2021年12月期间,导师胡镜清研究员用五苓散加减治疗老年期痴呆的医案,利用Excel软件建立研究数据库,并参照相关标准进行数据规范。以每一个医案为共现依据,分别构建证候、症状、舌脉、治法、方药的矩阵数据库,采用Spss Modeler进行矩阵共现,用Aprior建模。最后,将得到的证候、症状、舌脉、治法、方药的矩阵数据导入(Gephi-0.9.2)进行可视化分析。(2)使用TCMSP数据库,分别检索并收集泽泻、茯苓、猪苓、白术、桂枝的化学组成成分。基于Uniprot数据库,对五苓散活性成分以及对应的靶点名称进行统一,得到药物的潜在作用靶点。将得到的五苓散的活性成分以及对应的靶点上传至Cytoscape3.9.0软件进行构建五苓散药物-成分-靶点的网络图。在Gene Cards数据库中,以“Alzheimer”为关键词检索,下载老年期痴呆相关靶点。将得到的药物靶点和老年期痴呆的相关靶点,运用Venny 2.1在线工具进行比对筛选出五苓散与老年期痴呆的共同靶标基因,以获得五苓散治疗老年期痴呆的潜在靶点。把得到的潜在靶点基因输入到STRING数据库进行检索,即可得到PPI网络数据,运用Cytoscape3.9.0软件构建潜在靶点蛋白的相互作用网络,使用Centiscape2.2插件,对网络进行拓扑学分析。用生物信息学资源数据库DAVID对五苓散作用于老年期痴呆的潜在靶点进行GO、KEGG通路富集分析。最后,利用五苓散与老年期痴呆的共同靶点基因与通路注释分析的结果,采Cytoscape3.9.0建立“疾病-药物-靶点-通路”网络模型进行分析。研究结果:(1)共纳入29个医案,涉及8种证候,54种症状,27种舌脉,8种治法,62味中药。借助可视化软件Gephi构建胡师用五苓散加减治疗老年期痴呆的知识图谱。(2)共得到五苓散的有效成分50种,删除重复活性成分后共46种。其对应靶点108个,删除重复靶点后共44个靶点。其中白术含有7种有效成分,18个作用靶点;茯苓含有15种有效成分,21个作用靶点;桂枝含有7种有效成分,50个作用靶点;泽泻含有10种有效成分,9个作用靶点;猪苓含有11种有效成分,10个作用靶点。(3)共得到1401个老年期痴呆相关靶点,运用Venny 2.1在线工具得到五苓散与老年期痴呆的交集靶点共有30个。(4)构建PPI网络,得到8个核心靶点分别是ACHE、CAT、PTGS2、CASP3、NR3C1、JUN、ESR1、RELA。(5)通过KEGG富集分析得到Pathways in cancer、Lipid and atherosclerosis、Pathways of neurodegeneration-multiple diseases等81条信号通路。GO富集分析得到217条信号通路,其中BP有response to estradiol、response to lipopolysaccharide、response to drug等135个条目,CC有neuron projection、membrane raft、macromolecular complex等37个条目,MF有RNA polymerase II transcription factor activity,ligand-activated sequence-specific DNA binding、enzyme binding、steroid binding等45个条目。研究结论:(1)胡师用五苓散化裁治疗老年期痴呆的典型症状为:健忘、小便频、失认、不寐;核心舌脉为:脉沉、脉细、苔水滑、齿痕舌。(2)通过检索TCMSP数据库发现五苓散有多种活性成分,主要包含MOL000358(β谷甾醇)、MOL000296(蛇床子素)、MOL000049(3β-乙酰氧基苍术酮)、MOL004576(花旗松素)、MOL000492(儿茶素)等活性成分可能成为五苓散治疗老年期痴呆的核心成分。(3)通过五苓散活性成分的靶点预测筛选出ACHE、CAT、PTGS2、CASP3、NR3C1、JUN、ESR1、RELA等靶点作为五苓散治疗老年期痴呆的核心靶点。(4)通过KEGG、GO分析发现五苓散主要通过PI3K-Akt signaling pathway、TNF signaling pathway、Apoptosis、Pathways in cancer、Lipid and atherosclerosis等通路发挥发挥治疗老年期痴呆的作用。
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