【摘 要】
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近年来,抗体疗法在肿瘤临床受到越来越多的关注,尤其以CD20为靶点治疗非何杰金氏淋巴瘤的单克隆抗体(包括放射性标记的抗体)在临床上已经取得了令人瞩目的成功.目前已有Rituximab、Bexxar、Zevalin三种抗CD20的单抗药物上市,说明抗CD20的单抗在临床应用具有很好的前景.HI47是我所于1990研制成功的抗CD20鼠源性单克隆抗体,CD20-7是以HI47为母体,通过随机突变的方法
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近年来,抗体疗法在肿瘤临床受到越来越多的关注,尤其以CD20为靶点治疗非何杰金氏淋巴瘤的单克隆抗体(包括放射性标记的抗体)在临床上已经取得了令人瞩目的成功.目前已有Rituximab、Bexxar、Zevalin三种抗CD20的单抗药物上市,说明抗CD20的单抗在临床应用具有很好的前景.HI47是我所于1990研制成功的抗CD20鼠源性单克隆抗体,CD20-7是以HI47为母体,通过随机突变的方法,得到的Fab的高表达突变株.本文的目的是以CD20-7为出发菌株,构建双聚体F(ab)<,2>的表达体系,研究其体内外活性,并对F(ab)2中试发酵、分离纯化和F(ab)<,2>与放射性同位素偶联的条件进行优化.通过对CD20-7质粒pYZFcd20的碱基序列的改造,在CH1基因的末端添加了一截二聚化结构的编码序列,构建了抗CD20嵌合抗体突变体HI47F(ab)<,2>的表达载体.摇瓶表达显示,总抗体表达量为3.8mg/ml,F(ab)<,2>含量为15%.从接种量、通气量、种子龄、培养基pH值、发酵温度、发酵周期等六项发酵工艺指标对HI47 F(ab)<,2>含量的影响进行了考察,确定了摇瓶发酵的最佳条件.在NLF 19L发酵罐中进行了HI47 F(ab)<,2>工程菌的高密度发酵,最终菌体密度OD<,550>=140,湿菌体产量200g/L,抗体片段产量达241mg/L,F(ab)<,2>为15%,基本实现了我们的初步目标.分别试验了凝胶过滤、疏水层析、离子交换层析法对F(ab)<,2>进行分离纯化.产品纯度分别为90.5%、89.3%、92.3%,回收率分别为65%、67%、70.2%.确定离子交换是一种分离量大、回收率高、纯度高的理想的分离纯化方法.我们成功的构建了F(ab)<,2>的表达体系,并实现了中试发酵;对F(ab)<,2>的体内外活性的研究表明,F(ab)<,2>能特异的结合CD20<+>B淋巴瘤细胞,并能抑制移植瘤的生长:F(ab)<,2>与同位素的偶联成功,为放射免疫治疗奠定了基础.
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