槲皮素调控SIRT3对MEHP氧化应激状态下小鼠次级卵泡体外发育的实验研究

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目的:  以小鼠次级卵泡为研究对象,采用MEHP诱导小鼠次级卵泡发生氧化应激,观察槲皮素对氧化应激状态下小鼠卵子发育的影响,探讨槲皮素抗氧化作用的相关信号通路和机制。  方法:  1.收集小鼠次级卵泡,采用不同浓度的MEHP和槲皮素体外培养12天,并在第12天时进行促排卵,第13天收集成熟卵子观察卵子发育情况,并评估其形态学情况。  2.收集卵泡培养液,使用化学发光微粒子免疫检测法评估培养液中激素雌二醇,睾酮,孕酮的浓度。  3.采用JC-1法,检测卵子和颗粒细胞的线粒体功能。  4.采用DCFH-DA法,检测卵子内ROS浓度的变化。  5.采用RT-PCR法,检测SIRT3通路上,Cat、Gpx、Mnsod、Sod1、Foxo3a、p53的表达。  结果:  1.槲皮素在塑化剂MEHP培养的卵泡能够缓解氧化应激所造成对卵子最终成熟率和形态上的改变。  2.MEHP在体外培养卵泡的过程中,抑制睪酮和黄体酮的分泌,而槲皮素能够缓解这样的影响。  3.卵泡颗粒细胞和卵母细胞的发育互相影响并且支持对方,在MEHP环境下体外发育成熟,会严重影响两者的线粒体功能,而加入槲皮素培养后,两者的线粒体功能皆有恢复的现象。  4.槲皮素透过激活SIRT3产生过表达,FOXO3a脱乙酰降低表达,降低p53细胞凋亡信号,增高氧化应激产物清道夫蛋白MnSOD、SOD1、Gpx、Cat表达,有效缓解MEHP塑化剂对体外发育成熟的小鼠次级卵泡所造成的氧化应激伤害。  结论:  槲皮素能调控卵子线粒体功能,卵子内活性氧浓度,并透过激活SIRT3产生过表达,调控其下游Foxo3a、p53、MnSOD、SOD1、Gpx、Cat,来达到对MEHP氧化应激环境下体外培养小鼠次级卵泡和卵子的保护作用。
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