【摘 要】
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目的:优化菟丝子饼炮制工艺;对菟丝子饼进行质量评价;建立菟丝子饼指纹图谱并利用UPLC-MS法分析菟丝子炮制前后化学成分变化;初步探究菟丝子饼对肾损伤小鼠保护作用。方法:1、文献研究:对中国古代本草,药典,以及各地炮制规范等资料加以检索,分类,汇总,对菟丝子中药炮制方式,菟丝子化学成分和药理作用等方面加以综述。2、工艺研究:以加水量,煎煮时间,黄酒浓度为指标考察菟丝子饼最佳工艺,响应面优化炮制工艺
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目的:优化菟丝子饼炮制工艺;对菟丝子饼进行质量评价;建立菟丝子饼指纹图谱并利用UPLC-MS法分析菟丝子炮制前后化学成分变化;初步探究菟丝子饼对肾损伤小鼠保护作用。方法:1、文献研究:对中国古代本草,药典,以及各地炮制规范等资料加以检索,分类,汇总,对菟丝子中药炮制方式,菟丝子化学成分和药理作用等方面加以综述。2、工艺研究:以加水量,煎煮时间,黄酒浓度为指标考察菟丝子饼最佳工艺,响应面优化炮制工艺,确定菟丝子饼炮制工艺参数。3.菟丝子饼指纹图谱构建:采用HPLC法,构建了十批菟丝子及菟丝子饼样品指纹图谱,利用化学模式识别分析系统地对菟丝子及菟丝子饼进行质量控制。4.化学成分研究:利用UPLC-MS方法,对菟丝子炮制前后化学组成进行了研究,推断化学成分变化规律。5.菟丝子饼对急性肾损伤小鼠保护研究:小鼠被分为空白组、模型组、阳性组、菟丝子低、高组,菟丝子饼低、高组;实验组小鼠持续给药七天,第七天给药2h后腹腔内注射顺铂（20mg/kg）,造模后八至十天持续给药;用ELISA法对血清及肾组织中IL-6,IL-1β,TNF-α的浓度进行测定,进行HE染色观察肾脏组织的病理改变。结果:1、确定了菟丝子饼的最佳炮制工艺:加8倍水,黄酒比例10%,煎煮时间2h。2、指纹图谱结果匹配到10个共有峰,相似度均大于0.9,结果良好,混合对照品标示出6个化学成分,线性结果良好;主成分分析及最小偏二乘法分析确定菟丝子制饼前后的差异性成分为金丝桃苷,绿原酸,异鼠李素。4、UPLC-MS结果显示从菟丝子中共鉴定出26个化学成分,多属于黄酮类化合物,菟丝子及菟丝子饼在化学成分上变化不大,但其相对含量有明显差别。5、药理学实验初步探究菟丝子及菟丝子饼对急性肾损伤小鼠的保护作用。造模后模型组尿素氮升高,与阳性药组比较,菟丝子各组均有相应降低,菟丝子饼高低剂量组相比于给药组有明显差异,血肌酐在给药后有所下降,说明菟丝子经炮制后有明显的保护效果。ELISA试剂盒结果:模型组与空白组比较有明显升高,说明造模方法有效,给药组与模型组相比,有明显降低,说明给药后减轻了由顺铂所引起的急性肾损伤,HE染色结果表明模型组肾功能组织结构发生了明显病变,肾小球减少,肾小管表面上皮细胞发生剥落,肾间质可见大量的炎性细胞浸染,给药组肾脏组织病理变化明显改善,肾小球减少和肾小管表面上皮细胞发生剥落程度变少,肾间质纤维化现象显著减轻,炎性细胞浸润严重程度明显减轻。说明菟丝子及菟丝子饼对急性肾损伤小鼠有一定的保护作用。结论:通过本课题研究,确认了菟丝子饼最佳炮制工艺,指纹图谱及多指标含量测定全面评价了菟丝子饼质量。UPLC-MS分析菟丝子制饼前后化学成分存在明显。菟丝子饼对肾损伤保护作用可能与对急性肾损伤造成炎症及细胞凋亡有关。
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