【摘 要】
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枸杞是一种常见的食品,经常食用枸杞能够起到预防视网膜损伤、抗氧化、抗细胞凋亡等作用。最近的研究显示持续的光照会引起视网膜和晶状体组织的损伤,其机制可能是因为长时间光照使视网膜与晶状体等组织中产生过量的自由基,从而引起视觉功能受损。为了探究枸杞对光氧化应激型视力损伤的预防作用,本研究采用枸杞粗提物为原料,以光损伤小鼠和光损伤视网膜色素上皮细胞为模型,通过视网膜电图和光学相干断层成像等相关生理指标检测
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枸杞是一种常见的食品,经常食用枸杞能够起到预防视网膜损伤、抗氧化、抗细胞凋亡等作用。最近的研究显示持续的光照会引起视网膜和晶状体组织的损伤,其机制可能是因为长时间光照使视网膜与晶状体等组织中产生过量的自由基,从而引起视觉功能受损。为了探究枸杞对光氧化应激型视力损伤的预防作用,本研究采用枸杞粗提物为原料,以光损伤小鼠和光损伤视网膜色素上皮细胞为模型,通过视网膜电图和光学相干断层成像等相关生理指标检测,从体内和体外两个角度来探讨枸杞对光氧化应激型视力损伤的预防作用。主要研究内容如下:（1）枸杞粗提物制备工艺的确定。称取枸杞药材,每次提取水量为药材体积6倍,提取3次。合并提取液,提取液经浓缩得到水提物浸膏,再经醇沉（含乙醇量为70%）,干燥,制得枸杞粗提物。（2）枸杞粗提物中相关成分及总还原能力的测定。实验测得枸杞粗提物中枸杞多糖含量为3.87%,总酚含量为0.915±0.006 mg GAE/m L,总黄酮含量为1.738±0.181mg RE/m L。与红枸杞相比,枸杞粗提物中多糖含量提高了219.83%,总酚与总黄酮含量分别下降31.41%和33.97%,说明枸杞经水提醇沉后多糖类物质得到了一定程度的提高。另外,通过对总还原能力的测定发现,水提醇沉得到的枸杞粗提物的抗氧化活性高于红枸杞。（3）采用小鼠作为体内抗氧化作用研究模型。实验分别以剂量为280、370和460mg/kg的枸杞粗提物通过灌胃的方式对小鼠连续干预8周。结果表明,经过枸杞粗提物干预后,视网膜的形态和功能均得到了改善。视网膜、晶状体和血清的抗氧化指标测定结果显示,枸杞粗提物干预能够显著提高其SOD、CAT、GSH-Px活力与T-AOC,并降低其MDA含量。基因的研究结果显示,枸杞粗提物干预上调了光损伤小鼠视网膜细胞中Nrf2、NQO1、HO-1、CAT、GSH1、SOD1基因和Nrf2蛋白的表达水平,下调了Keap1基因的表达水平。（4）采用ARPE-19细胞作为体外抗氧化作用研究模型。通过以浓度为0.01 mg/m L、0.05 mg/m L、0.10 mg/m L、0.25 mg/m L和0.50 mg/m L的枸杞粗提物对ARPE-19细胞进行干预发现,枸杞粗提物能够有效提高光损伤ARPE-19细胞活力,并且上调细胞内Nrf2、HO-1和NQO1的基因和Nrf2蛋白表达量。RNA干扰实验结果表明,枸杞粗提物对光氧化应激型损伤的ARPE-19细胞保护作用可能与Nrf2信号通路的激活相关。
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