【摘 要】
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绿原酸是一种广泛存在于咖啡、茶叶以及多数水果和蔬菜中的多酚类物质,并且具有较好的抗氧化、抗炎和抗菌等生物功能。本研究采用人视网膜色素上皮-19（adult retinal pigment epithelial-19,ARPE-19）细胞作为视网膜细胞模型,探讨绿原酸对蓝光发光二极管（light-emitting diodes,LED）诱导的视网膜氧化损伤的潜在保护作用及其作用机制,以期为其在视力保
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绿原酸是一种广泛存在于咖啡、茶叶以及多数水果和蔬菜中的多酚类物质,并且具有较好的抗氧化、抗炎和抗菌等生物功能。本研究采用人视网膜色素上皮-19（adult retinal pigment epithelial-19,ARPE-19）细胞作为视网膜细胞模型,探讨绿原酸对蓝光发光二极管（light-emitting diodes,LED）诱导的视网膜氧化损伤的潜在保护作用及其作用机制,以期为其在视力保健产品领域的开发利用提供理论依据。在本研究中,采用不同浓度的绿原酸（25、50和100μmol/L）预处理细胞1 h后,蓝光LED下光氧化损伤24 h。通过MTT法测定细胞活力;乳酸脱氢酶（lacte dehydrogenase,LDH）检测法测定细胞毒性;2’,7’-Dichlorofluorescin（DCFH-DA）和Monochlorobimane（MCB）荧光探针测定细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）的水平;酶标仪测定细胞内源性抗氧化酶活力;Hoechst33342/PI双染、丫啶橙（acridine orange,AO）/溴化乙啶（ethidium bromide,EB）双染和Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞的凋亡形态变化及凋亡率;JC-1荧光探针测定细胞内线粒体膜电位的变化;实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western blotting）测定细胞内II相解毒酶以及核因子红系相关因子2（nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2）的m RNA和蛋白表达水平;Discovery studio 3.5分子对接软件,模拟绿原酸小分子与Keap1蛋白的作用方式和结合能量。研究结果显示,绿原酸预处理以浓度依赖的方式抑制蓝光LED诱导的ARPE-19细胞活力降低,缓解细胞毒性,抑制细胞内ROS的产生,提高GSH的水平,同时升高细胞内源性抗氧化酶SOD、CAT和GSH-Px的酶活力,减少MDA的含量,这些结果表明绿原酸能有效缓解蓝光LED诱导的氧化应激损伤;此外,绿原酸能够有效改善细胞的凋亡状态,降低细胞总凋亡率,提高线粒体膜电位,缓解线粒体损伤;更进一步的研究发现,绿原酸诱导了Nrf2的核移位,促进Nrf2的入核以及与ARE的结合,从而促进Ⅱ相解毒酶（HO-1、NQO1、GCLC和GCLM）的表达,保护ARPE-19细胞免受蓝光LED诱导的氧化应激损伤。最后,分子对接结果显示,绿原酸与Keap1蛋白之间以氢键、范德华力等作用力相互结合,并且结合作用较稳定,进一步说明了,绿原酸可以通过诱导Nrf2核移位,促进Ⅱ相解毒酶的表达,发挥抗氧化作用。综上所述,绿原酸可能通过激活Nrf2信号通路,促进抗氧化酶和II相解毒酶的表达,从而保护ARPE-19细胞免受蓝光LED诱导的氧化应激损伤。因此,绿原酸可以作为一种营养补充剂,来预防和改善氧化应激引起的视网膜疾病。
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