【摘 要】
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目的:通过建立一种家栖鼠常见鼠种的分子生物学鉴定方法,了解河北省2019年各地市鼠类动物的种类构成,结合鼠密度、携带汉坦病毒情况和基因型别等,为肾综合征出血热（Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS）防控政策的调整提供科学依据。方法:1.选取河北省11个地市部分区县,于春秋两季分别在居民区和野外采用夹夜法捕鼠,现场解剖,取鼠肺低温运至实验室,匀浆处理后
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目的:通过建立一种家栖鼠常见鼠种的分子生物学鉴定方法,了解河北省2019年各地市鼠类动物的种类构成,结合鼠密度、携带汉坦病毒情况和基因型别等,为肾综合征出血热（Hemorrhagic Fever with Renal Syndrome,HFRS）防控政策的调整提供科学依据。方法:1.选取河北省11个地市部分区县,于春秋两季分别在居民区和野外采用夹夜法捕鼠,现场解剖,取鼠肺低温运至实验室,匀浆处理后,提取总RNA。2.基于限制性片段长度多态性聚合酶链反应（PCR-RFLP）技术家栖鼠常见鼠种鉴定方法的建立:通过PCR扩增细胞色素氧化酶b（Cytochrome oxidase b,Cytb）基因并进行比对,找出三种常见家栖鼠（褐家鼠、小家鼠和黄胸鼠）的差异限制性内切酶位点,利用限制性内切酶Bam HⅠ和Eco RⅠ,对扩增产物进行酶切。酶切产物进行电泳,根据图谱鉴定鼠种。3.扩增细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（Cytochrome c oxidase subunitsⅠ,COⅠ）基因,并进行电泳和测序,将酶切结果与测序结果进行比对,评价方法的准确性。4.将上述实验在不同时间进行至少3次实验,评价方法的一致性。5.应用PCR-RFLP技术鉴定河北省HFRS宿主动物:Real-time PCR检测汉坦病毒（Hantavirus,HV）,统计分析宿主动物的密度、种类构成、带毒情况和基因型别。6.比对分析遗传距离并构建系统发育树。结果:1.PCR-RFLP技术的初步建立:褐家鼠酶切后产生362 bp和880 bp的两个片段;黄胸鼠三个片段分别为216 bp、362 bp和664 bp;小家鼠为1242 bp。2.准确性分析:图谱鉴定结果与COⅠ基因和Cytb基因测序结果一致,准确性为100%。3.一致性分析:将上述实验在不同时间进行至少3次实验,结果一致。4.2019年河北省各地市共捕鼠956只,其中居民区捕获856只,居民区的鼠密度为2.48%,高于野外鼠密度0.65%（χ2=169.874,P<0.001）;邯郸春季鼠密度高于秋季鼠密度（χ2=11.828,P=0.001）,保定、沧州春季鼠密度低于秋季鼠密度（χ2=12.611和5.958,P<0.001和P=0.015）),其他地区春秋季鼠密度基本持平;居民区褐家鼠占比70.68%,其次为小家鼠和黄胸鼠;褐家鼠和小家鼠主要分布在河北省东北部,黄胸鼠主要分布在河北省南部和中部部分地区。5.Real-time PCR检测HV阳性鼠肺24份,病毒型别为汉城病毒（Seoul virus,SEOV）,鼠种均为褐家鼠。6.33条Cytb基因序列比对分析,各鼠种种间遗传距离显著大于种内遗传距离。Cytb基因和COⅠ基因系统发育树显示,河北省常见的3种家栖鼠各形成一个单系,节点支持率为100%。7.基于Cytb基因对褐家鼠和黄胸鼠进行系统发育分析,河北省褐家鼠进化形成2个分支,地理隔离对褐家鼠的进化有一定影响;黄胸鼠形成2个较大的分支,石家庄和邯郸的黄胸鼠与贵州桐梓地区种群亲缘关系较近。结论:1.成功建立了基于PCR-RFLP技术的家栖鼠常见鼠种鉴定方法,准确性为100%,一致性好。2.本方法可成功应用于河北省常见家栖鼠的鼠种鉴定,具有方便快捷准确的特点,无需对整条序列进行测序。3.河北省居民区鼠密度和鼠带毒率高于野外,宿主动物携带的HV型别是SEOV。河北省褐家鼠和小家鼠主要分布在东北部,黄胸鼠主要分布在南部和中部部分地区。4.河北省褐家鼠种群进化分为2支,地理隔离对褐家鼠的进化有一定影响;石家庄和邯郸的黄胸鼠与贵州桐梓地区种群亲缘关系近。
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