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背景:子痫前期(preeclampsia,PE)是一种妊娠期特有的疾病,临床表现为妊娠期高血压、尿蛋白,同时伴有母体多器官功能障碍,是导致孕产妇及围产儿死亡的重要原因。虽然PE的发病机制尚不完全明确,但与母体免疫系统对妊娠产物的适应不良关系密切。Treg-Th17免疫平衡在建立和维持母体对胎儿和胎盘这一同种半异体移植物的免疫耐受方面起重要作用,已有报道Treg-Th17免疫失衡参与PE的发病,但其失衡的原因目前并不清楚。本课题组在前期研究中发现,PE病人滋养细胞异常高表达四次跨膜蛋白CD81,利用妊娠大鼠模型高表达CD81可成功诱导PE样症状。作为重要的免疫调节分子,我们提出假说:异常高表达的CD81导致母体Treg-Th17免疫失衡,参与PE发病。目的:研究滋养细胞高表达的四次跨膜蛋白CD81对母体底蜕膜、外周血两大母胎界面Treg-Th17免疫平衡的影响,及其诱导子痫前期发病的分子机制。方法:1.通过实时荧光定量PCR(q-PCR)、免疫组化、酶联免疫法(Elisa)、流式细胞分析术检测早发型子痫前期及同期非感染性早产对照蜕膜及外周血中CD81表达量与Treg、Th17细胞数量,并分析其相关性。2.利用磁珠分选出孕妇外周血中CD4+naive T细胞,与腺病毒AdCD81感染人绒毛外滋养细胞HTR-8所得上清共培后,利用流式细胞术分析初始T细胞分化为Treg、Th17细胞的比例,同时利用q-PCR检测Treg关键性核转录因子FOXP3及Th17关键性核转录因子RORC的表达。3.体外实验进一步探究滋养细胞高表达CD81抑制Treg细胞,促进Th17细胞分化的机制。首先利用超速离心法将上清分为外泌体及去除外泌体的培养上清,分别处理naive T细胞,明确去除外泌体的培养上清能够抑制Treg细胞,促进Th17细胞分化。随后利用q-PCR,Elisa以及细胞因子中和实验验证CD81通过调控IL-6的表达影响Treg、Th17细胞的分化。4.应用腺病毒AdCD81于妊娠第5天(GD5)尾静脉注射大鼠,同时应用IL-6的中和抗体,检测大鼠血压、尿蛋白,胎鼠体重,蜕膜及外周血中Treg、Th17细胞数量。结果:1.早发型重度子痫前期蜕膜及外周血中CD81表达明显升高,而Treg细胞数量及特异性转录因子FOXP3明显下降,Th17细胞数量及特异性转录因子RORC明显上升。且外周血中CD81含量与Th17细胞功能因子IL-17呈正相关。2.滋养细胞HTR-8高表达CD81培养上清可抑制初始T细胞向Treg细胞分化,促进向Th17细胞分化,且这一作用主要由去除外泌体的上清引起。CD81高表达可活化NF-kB信号通路,促进细胞因子IL-6的表达与分泌,中和IL-6后可明显逆转CD81高表达上清引起的Treg-Th17分化失衡。3.利用腺病毒AdCD81尾静脉注射大鼠成功构建子痫前期的动物模型,在此模型中检测到蜕膜及外周血中FOXP3表达量、Treg细胞数量明显下降,RORC表达量、Th17细胞数量明显上升。给予IL-6的中和抗体后,可成功逆转Treg-Th17免疫失衡,同时观察到模型大鼠血压及尿蛋白的改善。结论:早发型重度PE患者滋养细胞中异常高表达的CD81通过激活NF-kB信号通路,增加IL-6的表达与分泌,来促进IL-6/STAT3/IL-17信号通路,并抑制FOXP3,从而促进Th17抑制Treg细胞,破坏母胎界面的免疫耐受状态,最终导致PE的发病。本研究深入探讨了 CD81参与PE的免疫学发病机制,为早期预测及治疗子痫前期提供了理论基础。