【摘 要】
：
A型流感病毒（Influenza A virus,IAV）属于正黏病毒科（Orthomyxoviridae）甲型流感病毒属,其致病性因亚型和宿主类型各异。研究指出急性肺损伤和细胞因子风暴是流感病毒导致人类和动物发病死亡的重要原因,但缺乏对其致病机制的研究。Nedd8介导的类泛素化修饰称之为Neddylation,几乎参与所有细胞内的调控过程,并且越来越多的蛋白底物被证实可以被Nedd8修饰,其中包
【基金项目】
：
国家自然基金面上项目（NO.31572502）； 中央高校基本业务费（KYHW201702）；
论文部分内容阅读
A型流感病毒（Influenza A virus,IAV）属于正黏病毒科（Orthomyxoviridae）甲型流感病毒属,其致病性因亚型和宿主类型各异。研究指出急性肺损伤和细胞因子风暴是流感病毒导致人类和动物发病死亡的重要原因,但缺乏对其致病机制的研究。Nedd8介导的类泛素化修饰称之为Neddylation,几乎参与所有细胞内的调控过程,并且越来越多的蛋白底物被证实可以被Nedd8修饰,其中包括一些病毒蛋白,如流感病毒PB2蛋白。研究证实,Neddylation蛋白修饰通路在炎性反应和抗感染免疫中发挥重要的调控作用。而流感病毒与Neddylation修饰通路的互作研究鲜有报道。本研究拟通过体内外流感病毒感染实验揭示流感病毒与Neddylation蛋白修饰通路之间的互作关系,旨在为流感病毒致病分子机制研究提供新思路。具体研究结果如下:1、筛选用于Neddylation修饰研究的H9N2亚型流感毒株:Neddylation蛋白修饰通路在炎性反应中有着重要的调控作用,为了获得适应哺乳动物、哺乳动物细胞且炎性反应较强的低致病性H9N2亚型禽流感病毒,本实验通过对不同基因型不同宿主来源的4株H9N2亚型病毒在SPF雏鸡和BALB/c小鼠进行了致病性实验。SPF雏鸡致病性结果显示:这4株均能在呼吸道中复制,引起气管和肺脏炎性反应,且CD8+T细胞比例均有一定程度的上升;对小鼠致病性结果显示:A/swine/Jiangsu/C1/08（H9N2）（简称H9C1）和A/Guangdong/W1/2004（H9N2）（简称H9W1）株在小鼠肺脏中复制良好,其中H9C1株引起IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、MIP-1显著性上升。最终确定猪源的H9C1株为后续研究Neddylation修饰用的H9N2亚型模式流感毒株。2、A型流感病毒感染与Neddylation修饰之间的关系:为了明确流感病毒感染宿主细胞后Neddylation蛋白修饰通路的变化,本研究利用流感病毒H9C1、A/Califomia/04/09（H1N1）小鼠适应株（简称maCa04）病毒感染A549细胞。研究结果显示:H9N2和H1N1亚型流感病毒在感染早期（4～6h）激活了 Neddylation蛋白修饰通路,Neddylation修饰后的Cullin-1含量升高1.6～2.1倍,并引起IL-1β、IL-6和TNF-α显著升高（P<0.01）。3、MLN4924抑制Neddylation修饰对流感病毒致病性影响:为了探明Neddylation蛋白修饰对流感病毒的复制及致病性影响,本研究利用Nedd8活化酶（E1）（Nedd8 E1 Activating Enzyme,NAE1）特异性抑制剂MLN4924处理A549细胞,分别感染不同流感病毒。结果表明:MLN4924抑制剂阻断Neddylation修饰后,流感病毒在细胞中的复制能力明显降低,炎性反应明显降低。为了验证MLN4924的体内抑制病毒作用,将200 μg MLN4924抑制剂经鼻腔给药预处理BALB/c小鼠,再将104 TCID50的maCa04、105 TCID50的H9C1和5×104 TCID50的PR8病毒感染小鼠。结果显示:弱毒株H9C1株感染组,经MLN4924给药后,肺脏中病毒载量明显降低,强毒株（maCa04和PR8）感染组有20%小鼠得以存活,肺脏中病毒载量明显降低,肺部IL-1β、IL-6和TNF-α等炎性因子表达量明显降低。4、Cullin-1蛋白与流感病毒蛋白相互关系研究:为了阐明流感病毒蛋白与Neddylation通路之间的互作关系,本研究利用慢病毒shRNA系统敲低Neddylation通路相关因子,构建Cullin-1敲低（KD）细胞系。Cullin-1敲低细胞系感染流感病毒后的病毒滴度明显升高,表明该CRL1通路负调控流感病毒感染。进一步通过免疫共沉淀技术,结果发现:Cullin-1负调控NS1的的表达水平,进一步研究表明Cullin-1与NS1存在互作关系,NS1极有可能劫持Cullin-1-RING E3连接酶复合体（CRL1）,负调控CRL1对其他病毒蛋白的降解作用。
其他文献
在耕地资源紧缺的形势下,通过施用化肥提高作物单产,是减缓粮食需求压力、保障粮食安全的重要途径。然而,农户为了达到作物高产目的而过量施用化肥,导致了当前高投入、低效率以及高环境代价的粮食生产现状。因此,探索优化施肥下作物稳产增效的潜力与土壤的微生物学特征,进而构建土壤-微生物-作物三位一体的养分优化管理模式,是实现农业高产高效可持续生产的迫切需求。本研究通过农户调研结合文献整合分析,同时进行三年的田
土壤盐渍化是一个全球性问题,对生态环境和农业生产带来了巨大的负面影响。盐胁迫导致植物生长发育迟缓,由此引发多种生理反应。植物形成各种生理、细胞和遗传机制使其在高盐胁迫下得以生存,其中包括SOS（Salt overly sensitive）系统、植物激素、抗氧化防护系统、渗透调节物质和膜脂信号等。植物磷脂酶D（Phospholipase D,PLD）是磷脂代谢和应答非生物胁迫的重要酶类。PLD及其水
植物为了适应土壤中不同且变化的营养状况而长期进化产生出灵活和复杂的调控机制。由于土壤环境中矿质营养使用效率直接影响作物的产量和品质,因此对植物矿质元素吸收、转运、分配和利用的稳态分子调控机制需要从多角度深度解析。目前研究主要以转录因子为中心的转录调控为主,而对可变剪接介导的转录后水平调控的功能基因组研究比较欠缺,甚至被低估。可变剪接不仅丰富了蛋白质多样性,而且可以通过转录后调控机制调控基因表达,从
褐飞虱（Nilaparvata lugens Stal）是危害水稻的主要害虫之一,在亚洲稻区频繁爆发。除了直接刺吸植物茎秆汲取营养、产卵为害外,褐飞虱导致的水稻病毒传播更造成了进一步为害。长期以来,很多种类的杀虫剂被用于防治褐飞虱,包括有机磷类、氨基甲酸酯类、苯吡唑类、噻嗪酮、吡蚜酮和新烟碱类杀虫剂。然而,褐飞虱对众多杀虫剂产生了一定水平抗性,使得化学防治效果受到严重威胁。醚菊酯是一种非酯键的拟除
3-氨基-1,4-二甲基-5H-吡啶并[4,3-b]吲哚（中文简称色氨酸-P-1,英文简称Tryptophan-P-1）,是一种广泛存在于肉制品中的杂环芳胺类化合物,被国际癌症研究机构（IARC）认定为2B类致癌物,具有很强的致癌性和致突变性。色氨酸-P-1的减控对于肉制品的安全性极为重要。现有的色氨酸-P-1减控的方法主要包括:控制烹调时间/温度、加入其他物质减少色氨酸-P-1生成,使用色氨酸-
根际的有效定殖是植物根际促生菌（Plant growth-promoting bacteria,PGPR）发挥促生和拮抗功能的前提,而生物被膜形成能力的强弱是根际定殖的关键。芽孢杆菌生物被膜的形成受多种环境因素诱导。已知环境缺氧信号可刺激芽孢杆菌生物被膜形成,但具体的信号识别和调控机制并不清楚。解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）SQR9是本实验室从黄瓜种植发病区
The biofuels are receiving considerable attention as a substitute for petro diesel.For microalgae,the cell density or biomass and lipid contents are key components for biodiesel production.This study
双孢菇是世界上栽培最广、消费最普遍的食用菌,其营养丰富,具有高蛋白、低脂肪、低热量的特点并含有多种生物活性物质。然而,双孢菇采后极易腐烂变质,特别是含有大量多酚氧化酶（PPO）易引起褐变、风味劣变及营养损失。采用抑酶处理和脱水干燥加工能够延长双孢菇保存期且便于贮运,对缓解产销矛盾具有重要意义。低频热超声与微波真空干燥（MVD）为具有显著优势的抑酶预处理和脱水加工技术,其中前者对双孢菇物料的微观结构
一套完善的单倍型基因组对于物种在重测序,进化,基因功能研究等方面具有非常重要的意义。然而对于一些高度杂合且含有大量重复序列的基因组,例如梨,其单倍体基因组组装无疑是一个难题。此外,梨自交不亲和机制的存在也限制着后续的农业生产。本研究首先利用梨花粉单细胞基因组信息将之前梨基因组的38,304条细菌人工染色体（Bacterial artificial chromosome,BAC）序列分配到两套独立的
多肽信号在植物的生长发育过程中发挥重要的作用。快速碱化因子是富含半胱氨酸的多肽,参与植物的许多生长发育过程。本研究主要以‘砀山酥梨’花粉为材料,研究了 RALF多肽对梨花粉管生长的调控及分子机制,主要结果如下:1、从梨基因组中筛选得到24个PbrRALFs家族基因,根据系统发育分析,24个PbrRALFs被分为4个亚家族。复制模式分析表明全基因组复制事件（WGD）是梨RALF家族基因扩张的主要驱动