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研究目的 研究体外培养的鼠脑星形胶质细胞经过低氧预处理后对缺氧、缺氧/复氧的耐受性影响并探讨其机制。为临床上防治脑缺血缺氧以及缺血再灌等损伤提供基础理论依据。
方法 用纯化培养的星形胶质细胞进行或者不进行低氧预适应处理,观察对缺氧、缺氧/复氧损伤的影响。应用四唑盐(MTT)法检测细胞代谢活性变化,筛选出了保护作用比较明显的低氧预适应组别;应用Giemsa染色、透射电镜、流式细胞术、DNA电泳等观察细胞形态变化和凋亡发生情况;通过。Bcl-2、Bax的免疫细胞化学染色、SOD活性和MDA检测等试图揭示低氧预适应影响星型胶质细胞对缺氧、缺氧/复氧损伤耐受性的机制。
结果 对于缺氧耐受性影响:①低氧预适应48和72小时后进行缺氧损伤产生了一定程度的耐受,与单纯缺氧24小时损伤组相比细胞代谢MTT活性增强。②取HP48组进行的后续实验发现,虽然细胞仍然有典型的凋亡特征,但是形态学观察显示有相当部分的细胞形态结构比较正常。③Bcl-2的免疫细胞化学的结果显示低氧预适应组灰度值低于单纯缺氧损伤组,而Bax结果正好与之相反。提示低氧预适应组Bcl表达高于缺氧损伤组,而Bax表达低于缺氧损伤组。
对缺氧/复氧耐受性影响:①低氧预适应48和72小时后进行缺氧/复氧损伤同样产生了一定程度的耐受。②取HP48组进行后续实验,流式细胞术结果表明低氧预适应组细胞凋亡率低于缺氧/复氧损伤组。③低氧预适应组较多细胞超微结构正常。④缺氧/复氧损伤组和低氧预适应组SOD活性均升高,后者升高更为明显。⑤低氧预适应组MDA升高不明显,缺氧/复氧损伤组MDA显著增多。
结论①低氧预适应能够在一定程度上抑制由于缺氧、缺氧/复氧的细胞损伤作用,这种保护作用存在一定时间间隔要求;②低氧预适应对于细胞缺氧损伤的保护作用可能与维持:Bcl-2的表达以及抑制Bax的表达有关;③低氧预适应对于细胞缺氧/复氧损伤的保护作用可能与SOD活性升高,从而抑制缺氧/复氧过程中大量生成的氧自由基对DNA和细胞器膜等的损伤有关。