【摘 要】
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目的:通过建立重症急性胰腺炎（SAP）体内外模型研究大黄酸的保护作用,并从调控JAK2/STAT3信号通路对其作用机制进行初步探讨,以期为重症急性胰腺炎的治疗提供有效可靠的实验数据。方法:第一部分大黄酸对大鼠重症急性胰腺炎模型的保护作用的观察采用逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠的方法制备大鼠SAP模型,采用血清淀粉酶（Amylase,AMS）、脂肪酶(（Lipase,LPS）和血清髓过氧化物酶（Myelo
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（NSFC81973649）； 浦东新区临床高原学科（PWYgy2018-01）； 上海市卫生和计划生育委员会中医特色诊疗技术提升项目（zyjx-2017021）；
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目的:通过建立重症急性胰腺炎（SAP）体内外模型研究大黄酸的保护作用,并从调控JAK2/STAT3信号通路对其作用机制进行初步探讨,以期为重症急性胰腺炎的治疗提供有效可靠的实验数据。方法:第一部分大黄酸对大鼠重症急性胰腺炎模型的保护作用的观察采用逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠的方法制备大鼠SAP模型,采用血清淀粉酶（Amylase,AMS）、脂肪酶(（Lipase,LPS）和血清髓过氧化物酶（Myeloperoxidase,MPO）测试盒观测每组大鼠血清中相关生化指标AMS、LPS、MPO的表达情况;利用石蜡切片HE染色法观察胰腺的组织病理学变化;密切观察各组大鼠毛发色泽是否有脱落、精神状态、排尿排便、胰腺颜色光泽质软或质硬以及被膜是否完整、胰腺及其附近组织结构是否完整、是否有腹腔积液、出血和水肿等情况,并且每组大鼠计算生存率。第二部分大黄酸通过JAK2/STAT3信号通路对重症急性胰腺炎的保护作用的研究采用免疫组化法检测各组大鼠胰组织中JAK2/STST3通路相关蛋白的表达;用RT-q PCR法检测JAK2/STST3通路相关蛋白的m RNA水平的表达情况;用Western blot法检测JAK2/STST3通路相关蛋白蛋白水平的表达情况;酶联免疫吸附法检验炎症因子TNF-α、IL-6的表达水平;利用WB检测与凋亡相关的两个典型蛋白Bax和Bcl-2的表达水平。第三部分大黄酸对雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞损伤的影响和干预机制的研究AR42J细胞铺板于6孔板,细胞密度为1×10~5个/m L。实验分组分为对照组、模型组(雨蛙素10-8mol/L)、大黄酸组（终浓度0.25、0.5、1μg/m L）,通过淀粉酶（AMS）测试盒检测各组细胞上清AMS的含量,明确雨蛙素诱导胰腺腺泡细胞AR42J损伤模型的收样时间点;ELISA测定细胞上清中的TNF-α表达水平;以及采用WB检测分析JAK2/STAT3通路相关的蛋白表达情况。结果:第一部分大黄酸对大鼠重症急性胰腺炎模型的保护作用的观察ELISA、淀粉酶、脂肪酶和血清髓过氧化物酶试剂盒检测结果显示,SAP大鼠血清淀粉酶、脂肪酶、髓过氧化物酶水平明显升高（P＜0.001）,大黄酸能够有效降低这些炎症指标;HE染色的结果表明,大黄酸可以改善SAP造成的胰腺组织水肿、胰腺细胞结构破坏、出血等情况,差异有统计学意义（P＜0.01）;各组大鼠生存率为100%,相较于对照组,模型组的大鼠状态明显较差。第二部分大黄酸通过JAK2/STAT3信号通路对重症急性胰腺炎的保护作用的研究免疫组织化学结果提示,模型组大鼠胰腺组织中P-JAK2、P-STAT3表达量增加,而在大黄酸干预处理之后,P-JAK2、P-STAT3表达量降低,差异有统计学意义（P＜0.001）;RT-q PCR和WB的结果表明,大黄酸能够下调JAK2/STAT3相关通路蛋白的表达（P＜0.01）;凋亡相关蛋白Western blot和免疫组化的结果表明,大黄酸上调Bax的表达,下调Bcl-2的表达（P＜0.01）。第三部分大黄酸对雨蛙素诱导的胰腺腺泡细胞损伤的影响和干预机制的研究大黄酸能显著降低雨蛙素诱导的AR42J细胞上清分泌的淀粉酶（P＜0.001）。同时,Western Blot的结果表明,大黄酸能够显著抑制雨蛙素诱导AR42J细胞所引起的JAK2/STAT3信号转导通路中关键分子P-JAK2、P-STAT3、JAK2、STAT3蛋白表达的上升（P＜0.01）,其对重症急性胰腺炎细胞模型的保护作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路有关。结论:大黄酸对重症急性胰腺炎的胰腺损伤有一定的保护作用,降低炎症反应,机制可能与调控JAK2/STAT3信号通路有关。
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