宫颈癌是世界范围内使女性健康受到威胁的第二大恶性肿瘤,细胞癌变的首要原因是高危型的人乳头瘤病毒(HPV)持续感染宫颈上皮细胞。高危型HPV致癌与其指导宿主细胞表达病毒蛋白E6和E7密切相关,而宫颈癌细胞内E6和E7基因表达受到多种细胞转录因子的调控。EP400是一种细胞转录辅助因子,具有ATP酶的活性,参与染色质结构重塑过程。EP400通过染色质重塑功能调控基因转录及DNA的损伤修复过程,在细胞周期的调控、凋亡、发育、衰老过程中发挥着重要的作用。据报道EP400参与E2依赖性的HPV18 E6-E7基因抑制,而本课题将要研究在E2缺失的宫颈癌HeLa细胞中EP400对HPV18 E6-E7基因表达的影响。本论文首先使用siRNA在HeLa细胞敲低EP400,利用RT-PCR、Real-time PCR、Western blot方法检测了 HPV 18 E6-E7的表达情况,然后在HeLa细胞转染EP400的过表达质粒,利用 RT-PCR、Rea-time PCR、Western blot 实验检测了 HPV18 E6-E7的表达情况。结果发现:干扰EP400后,HPV18 E6-E7的表达上升;而过表达EP400能够抑制HPV18 E6-E7的表达。为了探讨EP400抑制HPV18 E6-E7的作用机制,首先利用HPV18启动子区域的荧光素酶报告基因质粒,通过荧光素酶活性检测EP400对HPV18启动子的调控作用。结果发现,EP400能够抑制HPV18启动子活性。然后,利用ChIP实验来检测干扰EP400后HPV18启动子上RNA聚合酶Ⅱ的募集水平的变化。结果表明:干扰掉EP400后,RNA聚合酶Ⅱ在HPV18启动子的募集增多。而后本论文通过ChIP实验对干扰掉EP400后HPV18启动子上组蛋白H3、H4的结合进行了检测,结果发现干扰EP400表达后,HPV18启动子区域组蛋白结合减少。以上结果提示EP400可能通过其ATP酶活性影响核小体的密度,进而影响了 RNA聚合酶Ⅱ在HPV18长控制区的募集,从而抑制HPV18启动子活性,最终达到抑制HPV18 E6-E7表达的作用。EP400对HPV18 E6-E7基因的抑制作用可以不依赖于E2的存在。接下来,本论文探讨了 EP400对细胞的增殖和迁移的影响。首先对EP400进行干扰,通过MTT、划痕以及Transwell实验对细胞增殖和迁移进行了检测。而后为了进一步验证这一实验结果,采用过表达EP400,通过MTT、划痕对以上实验结果进行了进一步的验证。结果表明:EP400可以抑制细胞的迁移,抑制率达到50%左右。但对细胞的增殖影响不明显。