大片吸虫（Fasciolagigantica）是一种危害反刍动物健康的常见寄生虫，严重影响动物的正常生长发育，给农业、畜牧业都带来了巨大的经济损失。因此，建立一种快速诊断大片吸虫的免疫学方法具有重要的现实意义。　　 本研究利用杂交瘤技术，以大片吸虫分泌排泄抗原作为免疫原，用建立的间接ELISA法进行筛选，制备了5株抗大片吸虫分泌排泄抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为6D3、6B4、7D1、7D2、7D4。经鉴定5株杂交瘤细胞染色体计数为90～110条，均大于亲本细胞，其亚类鉴定分别属于IgG2b，IgM，IgG1，IgM和IgM，5株单抗的轻链均为k型；经测定5株单抗上清效价分别为1：400、1：3200、1:6400、1：25600、1：6400，腹水效价分别为1:104、1:104、1:107、1:105、1：106;表位测定表明这五株McAb中，6D3与7D1、7D2，7D4与7D1、7D2作用于不同的表位，6D3与6B4可能识别同一表位或重叠表位，或同一表位有空间位阻，7D4与6D3，6B4与7D4、7D1、7D2可能具有空间位阻；5株单抗的相对亲和力为6B4>7D4>7D1>6D3>7D2;对传代细胞株和冻存复苏细胞株的测定表明，5株杂交瘤细胞株均能稳定地分泌单克隆抗体。　　 用单克隆抗体7D1包被ELISA板，用大片吸虫分泌排泄抗原免疫家兔，按常规方法制备兔多克隆抗体作为第二抗体，建立了检测大片吸虫分泌排泄抗原的双抗体夹心ELISA方法，结果表明，该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为：单克隆抗体7D1包被浓度为12.282ug/mL，兔抗牛多克隆抗体最佳稀释倍数为1：10000，酶标抗体工作浓度为l：8000，最佳封闭液为10％的脱脂奶粉，血清作用时间为lh，多克隆抗体作用时间为lh，酶标二抗作用时间为45min，底物显色时间为20min，酶标抗体以0D450nm≥0.130作为阴阳临界值。用该ELISA方法分别检测胰阔盘吸虫ES抗原、前后盘吸虫ES抗原、伊氏锥虫VSG抗原、弓形虫IHA抗原、旋毛虫和泰勒虫抗原。结果表明，该ELISA方法与以上病原均无交叉反应，具有良好的特异性。敏感性实验结果表明，该方法的最低检测下限为55.93ng/mL。同时检测247份临床样品，抗原检出率为23.89％。　　 本研究成功制备了五株稳定分泌抗大片吸虫分泌排泄抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞系，建立了间接ELISA方法和双抗体夹心ELISA方法，并对临床血清样品的大片吸虫循环抗原进行了检测，这些研究成果为大片吸虫病的免疫诊断、防治等的进一步研究奠定了基础。