【摘 要】
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根据已发表的猪链球菌2型(SS2)3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列,设计合成一对引物,对包括猪链球菌2型的39株链球菌gapdh进行检测,各种链球菌均能检出此基因,得到预期的1040bp的PCR
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根据已发表的猪链球菌2型(SS2)3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)基因序列,设计合成一对引物,对包括猪链球菌2型的39株链球菌gapdh进行检测,各种链球菌均能检出此基因,得到预期的1040bp的PCR产物,仅无毒株T15未检出。对HA9801,ZY05719株的gapdh测序,登录GenBank。经BLAST比对和DNAStar软件分析,2株菌的gapdh与GenBank中已发表的SS2的gapdh同源性为99.9%、99.8%。gapdh在链球菌中广泛存在,并高度同源。 对猪链球菌2型四川分离株ZY05719的gapdh全基因进行PCR扩增,并将此基因定向克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,构建了表达载体pET-32a-GAPDH。利用大肠杆菌BL21成功表达了58kD的GAPDH融合蛋白,并利用Novagen公司的His·Bind? Purification Kn(70239-3)纯化出GAPDH蛋白。 利用HEp-2细胞对GAPDH的黏附特性进行研究。ZY05719(GAPDH+)和T15(GAPDH-)虽均能黏附于HEp-2细胞,但GAPDH+菌株的黏附菌数显著高于GAPDH-株(P<0.05)。纯化的原核表达的GAPDH融合蛋白能显著降低GAPDH+株的黏附菌数(P<0.05),但不能阻断。对GAPDH-株无抑制作用。证明利用原核表达系统表达的GAPDH具有黏附作用。 基于猪链球菌2型(SS2)通过其胞外蛋白酶裂解猪流感病毒血凝素(HA)的假设,以MDCK细胞为载体,利用观察细胞病变、培养上清血凝素效价的测定、免疫荧光技术,证明SS2江苏分离株产生的胞外蛋白酶能增强猪流感病毒H3亚型广东分离株(A/Swine/Guangdong/4/2003)在MDCK细胞上出现的细胞病变及免疫荧光强度,且MDCK细胞感染病毒的上清HA效价有明显升高。
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