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[目的]1、研究长链非编码RNA-LLEST抑制白血病细胞BCL2表达的机制。2、研究长链非编码RNA-LLEST对白血病细胞AMPK活性的影响。[方法]前期研究表明,与缺铁性贫血、再生障碍性贫血等良性血液病相比,长链非编码RNA-LLEST在恶性血液病中呈现低表达,且可抑制白血病细胞BCL2的表达,但具体作用机制尚不明确。我们通过RNA FISH实验明确LLEST在白血病细胞株K562和SHI-1中的亚细胞定位。通过RNA反义纯化(RAP)实验及定量PCR检测LLEST是否与BCL2 3’UTR直接作用。运用生物信息学软件寻找与LLEST有同源序列且同时作用于BCL2 3’UTR的miRNAs,并对TargetScanHuman数据库进行分析寻找LLEST在BCL2 3’UTR上作用的靶点序列。通过双荧光素酶报告实验来验证LLEST在BCL23’UTR上作用的靶点序列。构建高表达LLEST的稳定细胞株K562及敲低LLEST的稳定细胞株U937,通过qRT-PCR方法验证相应细胞株中LLEST的表达情况。利用Western Blot检测LLEST在葡萄糖供应充足或缺乏时对白血病细胞株K562及U937中AMPK活性的影响。通过Western Blot检测LLEST在葡萄糖供应充足或缺乏时对前列腺癌细胞株PC-3以及非肿瘤性细胞株HEK293和HUVEC中AMPK活性的影响。[结果]1、RNAFISH结果表明,在白血病细胞株K562和SHI-1中,LLEST主要位于细胞质中。RAP及定量PCR结果表明LLEST是直接与BCL23’UTR相互作用的。通过对miRBase数据库及TargetScanHuman数据库进行分析,发现BCL2 3’UTR上的GCCTGTAA核苷酸序列可能为LLEST的作用靶点。双荧光素酶报告实验证实LLEST在BCL2 3’UTR上的作用靶点序列为GCCTGTAA,同时表明LLEST是以剂量依赖方式抑制BCL2表达。2、在葡萄糖缺乏的能量应激时,高表达LLEST的K562细胞株的AMPK磷酸化(p-AMPK)水平较空载体细胞株明显降低,恢复葡萄糖供应后,高表达LLEST的K562细胞株及空载体细胞株中p-AMPK水平均较无糖时降低,且前者的p-AMPK水平仍然低于后者;在敲低LLEST的U937细胞株中,当葡萄糖缺乏时,其p-AMPK水平明显高于对照组细胞株,恢复葡萄糖供应后,敲低LLEST的U937细胞株与对照组细胞株的p-AMPK水平均出现下降,且前者的p-AMPK水平高于后者,结果均具有统计学差异。3、在前列腺癌PC-3细胞株中,葡萄糖缺乏时,高表达LLEST的细胞株较空载体细胞株的p-AMPK水平低,恢复葡萄糖供应后,两者的p-AMPK水平均较无葡萄糖时低,且高表达LLEST的细胞株的p-AMPK水平仍较空载体细胞株低。在非肿瘤性的细胞株HEK293和HUVEC中,当葡萄糖缺乏时,高表达LLEST的细胞株与空载体细胞株的p-AMPK水平无明显差异,当恢复葡萄糖供应后,高表达LLEST的细胞株中p-AMPK水平较空载体细胞株低,结果具有统计学差异。[结论]1、长链非编码RNA-LLEST通过对BCL2 3TUTR的直接作用抑制BCL2的表达,且这种抑制效应是呈剂量依赖性的。2、长链非编码RNA-LLEST可抑制白血病细胞株中AMPK的磷酸化,且这种抑制效应不受葡萄糖水平的影响。3、长链非编码RNA-LLEST对非肿瘤性细胞株中AMPK磷酸化的抑制受到葡萄糖水平的影响。