【摘 要】
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心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)是以心脏成纤维细胞(Cardiac fibroblasts,CFs)在各种致病因素的作用下转化为肌成纤维细胞并过度增殖,细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)中胶原过度沉积及异常分布为特征的心脏间质重构,是一个持续进展且不可逆的病理过程,是冠心病、心肌病、高血压病等多种常见心脏疾病向终末期心脏病发展病理过程的必然过程
【基金项目】
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国家重点研发计划(No.2017YFD0400304); 天津市自然科学基金(No.17JCZDJC33600); 天津市高等学校创新团队(No.TD13-5015);
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心肌纤维化(myocardial fibrosis,MF)是以心脏成纤维细胞(Cardiac fibroblasts,CFs)在各种致病因素的作用下转化为肌成纤维细胞并过度增殖,细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)中胶原过度沉积及异常分布为特征的心脏间质重构,是一个持续进展且不可逆的病理过程,是冠心病、心肌病、高血压病等多种常见心脏疾病向终末期心脏病发展病理过程的必然过程。已有研究证实多种lncRNA在心肌纤维化中具有重要作用,然而lncRNA SNHG8在心肌纤维化中作用如何目前尚不清楚。因此,本课题旨在研究LncRNA SNHG8在心肌纤维化中的作用及可能的机制。首先,从SD大鼠乳鼠中提取的乳鼠心肌成纤维细胞,利用TGF-β分别处理乳鼠心肌成纤维细胞和NIH3T3成纤维细胞系以建立体外心肌纤维化细胞模型,通过q RT-PCR与Western blotting方法检测到心肌纤维化标志基因COL1A1、COL1A2、COL3A1、ACTA2、SM22α表达上调证实心肌纤维化细胞模型建立成功;利用q RT-PCR检测在此细胞模型中lncRNA SNHG8表达变化,证实其水平上调;利用si RNA干扰技术敲低SNHG8,发现心肌纤维化标志基因表达下降;进一步在加入TGF-β处理的同时敲低SNHG8,Ed U染色检测细胞增殖、划痕实验检测细胞迁移,结果证实敲低SNHG8可以抑制TGF-β诱导的细胞增殖,细胞迁移及心肌纤维化标志基因的上调。其次,进一步对与SNHG8位于同一染色体上的与细胞增殖密切相关的有丝分裂阻滞缺陷2(MAD2L1)的表达进行检测,结果发现TGF-β处理后MAD2L1升高,利用si RNA干扰技术敲低SNHG8后MAD2L1表达下降,进一步在TGF-β处理的同时敲低MAD2L1,结果发现敲低MAD2L1可以抑制TGF-β诱导的细胞增殖、迁移及心肌纤维化标志基因表达的上调。最后,已知P53基因参与心肌纤维化过程,通过MAD2L1的启动子序列进行分析发现,MAD2L1启动子上含有P53的结合位点,进一步利用染色质免疫沉淀实验证实P53可以结合在MAD2L1的启动子区域,然后通过RNA免疫沉淀实验证实SNHG8可以和P53直接相互作用。综上所述,本文发现敲低lncRNA SNHG8可以抑制TGF-β诱导的心肌纤维化,其作用机制可能为通过P53/MAD2L1影响细胞的增殖、迁移及纤维化进程,为临床治疗提供了理论依据。
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