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从1994年国内在鸡群身上第一次分离到H9N2亚型的禽流感病毒以后,H9N2亚型的禽流感病毒变得越来越流行。血凝素是禽流感病毒表面的一种糖蛋白同时也是病毒主要的抗原,它可以识别脊椎动物的靶细胞,但是在呼吸道中通过类似胰蛋白酶的蛋白酶将HA裂解为HA1和HA2亚基是病毒获得感染能力的必要条件。膜联蛋白Ⅱ (Annexin Ⅱ, A2)介导纤维蛋白溶酶原(plasminogen, PLG)转化为具有类似胰蛋白酶的蛋白酶活性的纤维蛋白溶酶(plasmin, PL),为HA分子裂解提供另一种途径,提高禽流感病毒复制的能力。抑制纤维蛋白溶酶原的活化就是阻碍了禽流感病毒的复制。本论文选择一株有强气溶胶传播能力的H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/7/2001(H9N2)(简称62株)和一株没有气溶胶传播能力的H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Shanghai/14/2001(H9N2)(简称70株)为研究对象,通过在有PLG和PLG的抑制剂6-氨基己酸(6-aminohexanoic acid,6-AHA)的存在下,62株和70株感染MDCK细胞的体外实验和感染四周龄鸡的体内实验,来探讨膜联蛋白Ⅱ与H9N2亚型禽流感病毒的气溶胶传播的关系。1.膜联蛋白Ⅱ介导H9N2亚型禽流感病毒的气溶胶传播的体外实验超速离心法得到纯化的62株和70株的病毒,Western blot检测发现纯化和未纯化的病毒中均能检测到A2蛋白,而且62株病毒中A2的表达浓度明显高于70株；在不同浓度的PLG条件下将病毒感染MDCK细胞,病毒感染后8-72h,70株的细胞半数感染量(TCID50)呈明显的下降趋势,而62株的TCID50最后呈明显上升趋势,暗示62株中A2介导PLG转化为PL的能力高于70株；而在同一浓度的PLG存在下,70株的TCID50明显高于不含PLG组或在PLG中加了其抑制剂6-AHA的对照组的TCID50;同样的趋势出现在62株中,表明PLG在病毒复制能力中有明显的作用,也证明A2介导的PLG转化为PL可以明显提高病毒的复制,增加病毒气溶胶传播的可能性。为进一步证实以上的观点,在加入PLG和同时加入PLG和6-AHA两种情况下,分别用62株和70株病毒感染MDCK细胞,由Western blot分析发现,在加入PLG组中,62株感染MDCK细胞中的PL蛋白表达的浓度明显高于70株；而在同时加入PLG和6-AHA组中,62株和70株病毒感染MDCK细胞中的PL蛋白浓度明显低于它们仅加PLG组的PL蛋白浓度；这些结果充分证明了PLG转化成PL的效率对H9N2亚型禽流感病毒的复制有重要的作用；而有气溶胶传播能力的病毒62株对PLG转化成PL的效率明显高于没有气溶胶传播能力的70株。由于A2存在于病毒中,为探讨A2在PLG转化成PL的效率中的作用,我们设计了62株和70株在加PLG组和同时加PLG和6-AHA组的两种条件下感染MDCK细胞,用Western blot分析感染病毒中A2蛋白的表达。结果在加PLG组中,70株和62株感染MDCK细胞上清中的A2蛋白表达量低于同时加PLG和6-AHA组,表明70株和62株的A2都有促进PLG转化为PL的作用。2.膜联蛋白Ⅱ介导H9N2亚型禽流感病毒的气溶胶传播的体内实验62株和70株在四周龄鸡体内的传播性实验表明,62株病毒有气溶胶传播的能力而70株病毒没有传播的能力；当给接种组鸡和气溶胶组鸡饲喂6-AHA时,62株和70株的攻毒组在鸡气管和泄殖腔的病毒分离率明显下降；尤其是62株气溶胶传播组的病毒的分离率明显降低,证明由于6-AHA对PLG的抑制作用,62株的气溶胶传播能力降低了。通过免疫组化方法发现,6-AHA明显抑制了病毒在鸡肺组织中的复制。表明6-AHA抑制了体内的A2介导PLG转化为PL,从而抑制了病毒在体内的复制和病毒的HA裂解为HA1和HA2感染宿主细胞,降低了病毒的气溶胶传播的能力。