本试验旨在探讨bta-miR-6517在黄牛脂肪细胞中的作用机制。主要试验方法如下:利用生物信息学分析bta-miR-6517前体上游区域CpG岛位置、启动子区域结合的转录因子以及筛选与脂肪分化相关的靶基因。利用荧光定量PCR检测bta-miR-6517在秦川牛和和牛心、肝、脾、肺、肾、脂肪和肌肉中的表达情况。根据靶基因预测结果,利用双荧光素酶报告试验验证bta-miR-6517与候选靶基因是否具有靶向关系。采用组织块法和消化法分离培养牛原代脂肪细胞。利用荧光定量PCR检测成脂分化诱导不同时间（0d、2d、4d、6d、10d）细胞中成脂标志基因PPARγ和bta-miR-6517的表达量,并对诱导0d和10d的细胞进行油红O染色。得到结果如下:（1）bta-miR-6517的生物信息学分析取bta-mir-6517基因上游10Kb序列,采用GPMiner和EMBOSS进行预测,得到其CpG岛位置在8573-9945nt处;利用PROMO预测出其启动子区域有与脂肪细胞增殖分化和脂质代谢调节的五个转录因子的结合位点,分别为C/EBPα、C/EBPβ、HSF1、AP-2α和C/EBP。利用生物信息软件得到MAT1A可能为bta-miR-6517的靶基因;targetscan预测显示MAT1A 3’UTR区与bta-miR-6517有两个可能的结合位点,分别位于67nt-74nt和288nt-295nt处。（2）bta-miR-6517的组织表达情况秦川牛中与心相比,肺、背脂和肌肉中bta-miR-6517的表达量极显著升高（P<0.01）,脾中bta-miR-6517的表达量显著降低（P<0.05）。和牛中背脂、腹脂和腹股沟脂中bta-miR-6517的表达量显著（P<0.05）高于心包脂,极显著（P<0.01）高于心、肝、脾和肺。（3）bta-miR-6517靶基因鉴定双荧光素酶报告载体经PCR和测序验证正确,与bta-miR-6517 mimics/mimics NC共转染到293T细胞中,48h后双荧光素酶报告检测结果显示wt-MAT1A-3’UTR2 mimics组相对荧光活性显著（P0.05）。说明bta-miR-6517与MAT1A-3’UTR2结合而与 MAT1A-3’UTR1 不结合。（4）bta-miR-6517在细胞中的表达情况利用组织块和消化法均成功分离出牛原代脂肪细胞,诱导后结果显示随诱导时间增加PPARγ和bta-miR-6517均呈上调趋势,第10d达到最大值,且与0d相比,PPARγ从第4d开始表达量极显著增加（P<0.01）,bta-miR-6517的表达量从2d开始显著升高（P<0.05）,4d开始极显著增加（P<0.01）。本研究结果显示,预测出bta-miR-6517前体上游启动子区域有C/EBPα、C/EBPβ、HSF1、AP-2α和C/EBP五个与脂肪细胞增殖分化和脂质代谢调节相关的转录因子结合位点。bta-miR-6517在脂肪和肌肉中高表达,并可与MAT1A 3’UTR2结合。bta-miR-6517在成脂分化过程中表达量呈上调趋势。因此,bta-miR-6517与MAT1A靶向结合可能会在脂肪细胞分化中发挥功能。