猪霍乱沙门氏菌（Salmonella Choleraesuis,S.Choleraesuis）于1885年由Salmon等人首次分离,属无荚膜、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌,在普通琼脂培养基上可形成中等大小、无色透明的光滑型菌落。该菌可引起2～4月龄仔猪副伤寒,其症状表现为急性败血症、顽固性下痢和慢性坏死性肠炎,治疗不及时会造成大批断奶仔猪死亡,给养猪业造成巨大损失。疫苗接种是预防该病最有效的策略,传统灭活疫苗存在免疫原性差,操作繁琐且对动物应激较大等缺陷;而弱毒活疫苗株减毒背景不清晰,存在毒力返强的风险;而基因缺失的减毒株克服了传统疫苗的缺陷。本研究以猪霍乱沙门氏菌作为研究对象,成功构建Δcrp、Δcya、Δaro A、Δaro B和Δaro AΔaro B基因缺失菌株;评价了其生物学特性、致病性;分析了Δaro AΔaro B缺失株的免疫学特性。主要内容包括:1.基因缺失株的构建:本研究以猪霍乱沙门氏菌为亲本菌株,利用λRed同源重组技术敲除crp、cya、aro A和aro B基因,并经PCR扩增和测序比对,确定Δcrp、Δcya、Δaro A、Δaro B和Δaro AΔaro B基因缺失菌株成功构建。2.生物学特性:在对数增长期,该5株缺失株在对数增长期的生长速度均慢于野生型菌株（Wild type,WT）株,且5株缺失株的运动性能也较WT株显著下降;生化特性结果中除Δcrp和Δcya株不能代谢甘露醇和山梨醇外,其余生化特性未发生改变;Δcrp株除对链霉素和利福平药物敏感性略微发生改变外,对其余药物敏感性未发生改变,其余缺失株的生化特性和药敏特性与WT株无明显差异,上述菌株在体外传20代后,其遗传特征保持稳定。3.猪霍乱沙门氏菌Δcrp、Δcya、Δaro A、Δaro B和Δaro AΔaro B缺失株致病性评价:将各缺失株以WT株100×LD50的等同菌量作为攻毒剂量接种BALB/c小鼠,Δcrp、Δcya株攻毒后其出现临床症状的时间均较WT组晚,且Δcya感染组出现临床症状较Δcrp感染组晚两天,且两组存活率均为20%。Δaro A、Δaro B和Δaro AΔaro B基因缺失株感染组小鼠的存活率均为100%,攻毒小鼠未表现临床症状。剖检可见WT、Δcrp和Δcya感染组小鼠的肝脏和脾脏出现不同程度的肿大,其中WT和Δcrp感染组小鼠的肝脏出现坏死结节;Δaro A、Δaro B和Δaro AΔaro B感染组剖检无明显症状。4.免疫学特性:对Δaro AΔaro B缺失株的免疫学特性进行初步评价,毒力实验结果表明,Δaro AΔaro B株比WT株毒力至少降低1.02×10~7。免疫保护分析结果表明,Δaro AΔaro B双基因缺失菌株可100%保护629.9×LD50亲本菌株的攻击,对6 299×LD50亲本菌株的侵袭也可提供40%保护。由此可见,猪霍乱沙门氏菌Δaro AΔaro B株的遗传特征稳定,毒力下降明显,且具有良好的安全性和免疫保护效果,为进一步重组表达外源保护性抗原、制备重组菌株奠定了坚实的基础。