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背景:卵巢癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一,其死亡率居妇科恶性肿瘤之首。其中,上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)是其最主要的病理类型。目前,针对卵巢癌还是以“手术+化疗”为主要治疗手段,但由于卵巢癌恶性程度较高,极易复发,治疗情况并不理想。因此,探寻新的治疗靶标,完善卵巢癌的治疗策略已迫在眉睫。近年来,铁代谢异常已被认为是肿瘤的特异性标记之一。近期研究表明,肿瘤可通过改变自身铁代谢的状态,从而帮助自身获得更好的生长优势。并且,异常的铁代谢,尤其是铁过载与肿瘤的发生以及癌症的发展密切相关。同时,已有报道证实,卵巢癌患者体内存在着铁元素的异常高表达。转铁蛋白受体(the transferrin receptor,TFRC)也被称为CD71,是调节细胞内铁元素转运过程的最重要膜蛋白。当细胞发生癌变时,通过TFRC吸收摄入铁元素的过程也成为了肿瘤细胞帮助自身生存生长的最重要途径之一。目前,关于TFRC在EOC中的表达模式以及其发挥作用的具体分子机制尚不清楚。基于此,本课题拟通过检测并分析TFRC在EOC临床样本组织中的表达情况以及其与细胞功能相关标志物的表达相关性,再结合体内和体外实验抑制TFRC的表达以探究TFRC在EOC病理生理进程中所发挥的作用以及其具体的分子机制,由此深入阐明TFRC在人类EOC发生发展过程中所扮演的角色。通过本课题的研究,不仅为EOC的治疗策略提供了新的靶标分子,更是为患者带来了新的希望。方法:1.利用流式细胞术、免疫荧光实验检测EOC临床样本中TFRC的表达情况,并利用在线数据库行生存分析及分子表达相关性分析。2.利用慢病毒载体转染技术构建稳定敲降TFRC表达的SKOV3及A2780细胞株,并通过q RT-PCR、流式细胞术以及Western blot实验对细胞的TFRC在m RNA及蛋白水平的表达进行验证。3.利用流式细胞术检测EOC临床样本中TFRC与Ki-67的表达相关性。4.利用CCK-8、EdU、细胞周期以及裸鼠皮下荷瘤实验研究TFRC在SKOV3及A2780细胞增殖中所发挥的作用。5.利用Transwell及裸鼠腹腔转移瘤模型实验研究TFRC在SKOV3及A2780细胞侵袭转移中所发挥的作用。6.通过RNA-seq找到TFRC的潜在作用靶分子AXIN2,并利用qRT-PCR、流式细胞术以及免疫组化实验,分别在细胞及临床组织中,对TFRC与AXIN2的表达以及二者的作用相关性进行验证。7.利用在线数据库对AXIN2行生存分析以及分子表达相关性分析。8.利用小干扰RNA转染技术敲降SKOV3及A2780细胞中AXIN2的表达,并通过CCK-8、Ed U以及Transwell实验研究AXIN2在细胞增殖及迁移中所发挥的作用。9.利用过表达质粒转染技术上调上皮性卵巢癌细胞中AXIN2的表达,并通过CCK-8及Transwell实验研究进一步明确AXIN2与TFRC在上皮性卵巢癌细胞增殖及侵袭转移中的作用相关性。结果:1.流式细胞术及免疫荧光实验结果示TFRC在EOC患者的癌组织中的表达高于其正常癌旁组织,在转移瘤组织中的表达高于其原位瘤组织;KM-plotter及PROgene V2数据库分析结果示TFRC表达越高,患者的总生存时间及无复发生存时间越短;UCSC Xena数据库分析结果示TFRC表达越高,患者更易发生血管或淋巴结的癌转移;GEO数据库分析结果示TFRC与细胞增殖及侵袭转移分子标志物的表达呈明显正相关。2.稳定培养和传代敲降TFRC表达的SKOV3和A2780细胞株。3.流式细胞术实验结果示在EOC临床样本中TFRC与Ki-67的表达呈明显正相关。4.敲降TFRC抑制上皮性卵巢癌细胞增殖及肿瘤生长:CCK-8及Ed U实验结果示TFRC敲降组细胞的吸光率及Ed U阳性率明显低于对照组;裸鼠皮下荷瘤实验结果示TFRC敲降组肿瘤的生长明显慢于对照组。5.敲降TFRC抑制上皮性卵巢癌细胞侵袭迁移及肿瘤转移:Transwell实验结果示TFRC敲降组中发生侵袭及迁移的细胞数量明显低于对照组;裸鼠腹腔转移瘤模型实验结果示TFRC敲降组裸鼠体内的转移瘤结节数量明显少于对照组。6.TFRC可能通过正向调控AXIN2表达促进上皮性卵巢癌细胞增殖及侵袭转移:利用RNA-seq检测结果进行生物信息学分析,结果示AXIN2可能为TFRC在上皮性卵巢癌细胞增殖及侵袭转移中的潜在作用靶分子;qRT-PCR、流式细胞术以及免疫组化实验结果示在上皮性卵巢癌细胞及临床组织中,TFRC与AXIN2的表达呈明显正相关。7.AXIN2与卵巢癌患者的不良预后相关,与细胞增殖及侵袭转移标志物的表达呈正相关8.敲降AXIN2抑制上皮性卵巢癌细胞增殖及迁移:CCK-8、EdU及Transwell实验结果示AXIN2敲降组细胞的吸光率、Ed U阳性率以及迁移细胞的数量明显低于对照组。9.上调AXIN2促进上皮性卵巢癌细胞增殖及迁移,并可逆转因敲降TFRC导致的细胞增殖及迁移能力下降:CCK-8及Transwell实验结果示AXIN2过表达组细胞的吸光率及迁移细胞的数量明显高于对照组,共转染组细胞的吸光率及迁移细胞的数量明显高于TFRC敲降组。结论:1.TFRC在EOC中高表达且与患者的不良预后相关。2.敲降TFRC抑制上皮性卵巢癌细胞增殖及侵袭转移。3.TFRC与AXIN2在上皮性卵巢癌细胞及临床样本中呈显著正相关性。4.敲降AXIN2抑制上皮性卵巢癌细胞增殖及迁移,而上调AXIN2促进上皮性卵巢癌细胞增殖及迁移,并可逆转因敲降TFRC导致的细胞增殖及迁移能力的下降。5.TFRC通过正向调控AXIN2的表达,从而促进上皮性卵巢癌细胞增殖及侵袭转移,进而在EOC发生发展过程中发挥着促癌基因的作用。