【摘 要】
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目的探讨PDGF-D和ERK信号通路对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法体外培养正常支气管上皮细胞HBE、肺癌细胞系H1299和A549,Western blot检测三种细胞中PDGF-D的表达水平,选择低表达PDGF-D的H1299细胞转染GV230-PDGF-D过表达质粒,高表达PDGF-D的A549细胞转染si RNAPDGF-D,同时添加ERK信号通路的特异性抑制剂PD
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目的探讨PDGF-D和ERK信号通路对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其可能的作用机制。方法体外培养正常支气管上皮细胞HBE、肺癌细胞系H1299和A549,Western blot检测三种细胞中PDGF-D的表达水平,选择低表达PDGF-D的H1299细胞转染GV230-PDGF-D过表达质粒,高表达PDGF-D的A549细胞转染si RNAPDGF-D,同时添加ERK信号通路的特异性抑制剂PD98059。实验分为空白组、对照组、实验组（PDGF-D或si PDGF-D）、实验组+抑制剂（PD98059）组、抑制剂（PD98059）组。MTT法检测各组细胞的增殖活性;划痕实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力;q PCR检测各组细胞中PDGF-D m RNA表达水平;Western blot检测各组细胞中PDGF-D、p-ERK、ERK、Snail、MMP-1及CD44蛋白的表达水平。结果1、Western blot实验结果显示:三种细胞中,H1299细胞中PDGF-D蛋白表达水平较低（P＜0.01）;A549细胞中PDGF-D蛋白表达水平较高（P＜0.01）,均高于正常支气管上皮细胞HBE。2、Western blot和q PCR结果显示:与空白组或对照组相比,过表达PDGFD的H1299细胞中PDGF-D的蛋白表达水平升高;沉默PDGF-D的A549细胞中PDGF-D蛋白和m RNA表达水平均下降（P＜0.01）。3、MTT实验结果显示:与对照组相比,过表达PDGF-D能促进肺癌H1299细胞增殖（P＜0.05）;与对照组相比,沉默PDGF-D肺癌A549细胞增殖能力下降（P＜0.05）;ERK抑制剂PD98059能抑制上述作用（P＜0.05）。4、划痕实验结果显示:与对照组相比,过表达PDGF-D能促进肺癌H1299细胞迁移（P＜0.05）;与对照组相比,沉默PDGF-D肺癌A549细胞迁移能力下降（P＜0.05）;ERK抑制剂PD98059能抑制上述作用（P＜0.05）。5、Transwell实验结果显示:与对照组相比,过表达PDGF-D能促进肺癌H1299细胞侵袭（P＜0.05）;与对照组相比,沉默PDGF-D肺癌A549细胞侵袭能力下降（P＜0.05）;ERK抑制剂PD98059能抑制上述作用（P＜0.05）。6、Western blot结果显示:与对照组相比,过表达PDGF-D的H1299细胞中p-ERK蛋白表达水平明显增加（P＜0.05）,总ERK蛋白表达水平不变;同时Snail、MMP-1、CD44蛋白表达水平也增加（P＜0.05）;与对照组相比,沉默PDGFD的A549细胞中p-ERK、Snail、MMP-1、CD44蛋白表达水平下降（P＜0.05）,总ERK蛋白表达水平不变,ERK抑制剂PD98059能抑制上述作用（P＜0.05）。结论PDGF-D可能通过磷酸化ERK信号通路,上调Snail、MMP-1、CD44蛋白表达,从而促进肺癌细胞的增殖、迁移及侵袭。
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