目的由于黑色素瘤外泌体在体外有抑制原代人类免疫细胞的功能,而NK细胞可以非特异性直接杀伤肿瘤细胞,当人体受到癌细胞攻击和病毒感染时,NK细胞是人体的第一道防线。因此,黑色素瘤外泌体对NK细胞功能所起的作用及其机制值得深入研究。本研究旨在通过体内外实验分析黑色素瘤细胞衍生的外泌体对NK细胞功能作用的影响,进一步了解外泌体在黑色素瘤发生发展中对NK细胞所发挥的作用及其机制。方法动物实验:用CRISPER CAS9技术将黑色素瘤细胞外泌体释放依赖的Rab27a敲除,将外泌体缺失的B16细胞系与B16细胞系分别植入不同小鼠皮下,观察肿瘤生长大小及用流式检测肿瘤局部组织和脾脏中的NK细胞数量水平。细胞实验:首先利用超速离心法将黑色素瘤细胞的外泌体分离纯化出来,将磁珠分选获得的NK细胞分为两组:实验组加外泌体进行培养,对照组加PBS,用流式细胞仪检测NK细胞的增殖与凋亡的情况,之后用LDH检测外泌体处理NK细胞后NK细胞对其靶细胞YAC-1的杀伤能力及用流式评估NK细胞表面受体的表达情况及分泌细胞因子IFN-γ的能力。结果动物实验中:与对照组比,外泌体缺失B16细胞系成瘤较小,肿瘤局部组织和脾脏中NK细胞数量较多。细胞实验中:黑色素瘤细胞分泌的外泌体处理NK细胞后,与对照组相比,NK细胞的增殖峰没有明显变化,但实验组的NK细胞多了5%的凋亡率;实验组NK细胞的细胞毒活性受到抑制,并且外泌体浓度越高,细胞毒活性受到抑制越明显。在外泌体处理NK细胞后,NK细胞表面受体NKP46、DNAM-1,NKG2D降低,FASL和TRAIL在NK细胞上的表达降低,并且NK细胞分泌IFN-γ和TNF-α的能力减弱。结论黑色素瘤外泌体对NK细胞的增殖功能影响不大,但可以使NK细胞发生凋亡,且可以通过抑制激活性受体DNAM-1、NKP46和NKG2D的表达来影响NK细胞的杀伤作用,在具体的杀伤作用机制中,FASL和TRAIL的表达以及IFN-γ和TNF-α的释放受到抑制。