益肾汤对糖尿病大鼠肾组织NF-κB表达的影响

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目的:用链脲佐菌素腹腔注射(Streptozocin,STZ)诱发、建立糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)大鼠模型;观察中药复方益肾汤对实验性DM大鼠肾脏的保护作用及对核转录因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)表达的影响,并以血管紧张素Ⅱ受体阻断剂(Angiotensin receptor blocker,ARB)缬纱坦作为对照,探讨益肾汤保护糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)的作用机制。  方法:成年雄性SD大鼠41只,随机分成正常对照组(control group,CON)、DM未治疗组(DMN)、DM缬纱坦治疗组(VST)、DM益肾汤治疗组(YST)4组。DM建模组大鼠于空腹状态一次性腹腔内注射2%STZ诱发DM模型;72小时后测定血糖,如血糖﹥16.7mmol/L,并稳定2-3天即算建模成功。VST组给予20mg/公斤体重/天缬纱坦灌胃;YST组给予相当于生药6.5g/公斤体重/天的浓缩药液灌胃;CON及DMN组按相当剂量饮用水灌胃。实验开始前3周每周测量大鼠体重,后5周每天测量体重,根据体重调整灌胃剂量。8周后,空腹测定每只大鼠体重;留取24小时尿液,记尿量,以特异性放射免疫法测定尿白蛋白含量,并计算尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rates,UAER);以10%水合氯醛麻醉处死大鼠,取血测定血糖、血肌酐、血尿素氮等指标;取左肾经生理盐水洗涤并擦干后称重;取右肾纵形切开一半以10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,制作切片进行免疫组化检测肾组织 NF-κB的表达、分布,并利用图像分析系统进行定量分析。  结果:DM造模组大鼠成功诱发DM造模成功。YST、VST、DMN及CON组血糖分别为(34.3±9.7)mmol/L,(29.8±11.6) mmol/L,(38.3±6.9) mmol/L,(13.0±2.9) mmol/L,组间比较具有统计学差异(p<0.01);YST、VST、DMN组间比较无统计学差异。YST、VST、DMN及CON组的肾脏肥大指数(肾重/体重,mg/g)分别为4.8±0.9、4.7±1.0、5.3±0.8、3.5±0.6,组间比较具有统计学差异(p=0.003),但YST、VST与DMN组间比较无统计学差异。YST、VST、DMN及CON组的UAER分别为192±88、188±88、319±62、24±8(ng/min),组间比较有统计学差异(p<0.01);YST、VST及 DMN组间比较亦具统计学差异(p<0.05);YST与 VST组间比较无统计学差异(p>0.05)。显微镜下图像分析显示,YST、VST、DMN及CON组大鼠肾脏NF-κB表达量(累积光密度)分别是5.08±0.18,5.11±0.12,5.47±0.12,4.5±0.33,组间比较具有统计学差异(p<0.001);YST、VST及 DMN组间比较亦有统计学差异(p<0.05);YST与VST组间比较无统计学差异。NF-κB表达量与肾脏肥大指数(r=0.6,p=0.002)、空腹血糖(r=0.67,p<0.001)、UAER(r=0.76,p<0.001)呈显著正相关。各组大鼠实验前后的体重、血肌酐、尿素氮比较均无统计学差异。  结论:DM大鼠成模8周时已出现明显肾功能改变。“益肾汤”具有减少DM大鼠UAER、抑制肾脏NF-κB的表达的作用。“益肾汤”减少DM大鼠UAER、抑制肾脏NF-κB表达的作用与缬沙坦相仿。“益肾汤”防治DN的作用与其减少肾脏NF-κB表达有关。
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