论文部分内容阅读
作为过滤性捕食的多细胞无脊椎动物,海绵独特的捕食方式使其体内及体表富集了大量的微生物。由于其独特的生存环境,海绵来源真菌在长期的自然选择过程中形成了独特而丰富多样的生物合成途径,能够产生许多结构新颖和生物学活性多样的次级代谢产物,成为海洋生物活性物质研究的热点和寻找药物先导化合物的重要资源。为了寻找新的活性先导化合物,本论文对采自南海西沙海域的海绵进行了微生物分离及活性筛选,并从中选取了1株海绵来源真菌的次级代谢产物进行了研究,并初步评价了化合物的抗肿瘤和抗H1N1流感病毒活性。本研究从采集于西沙群岛附近海域的22个海绵样品中共分离纯化出98株真菌,采用小鼠P388白血病细胞镜检细胞毒活性筛选模型,共筛选出25株活性真菌。结合TLC薄层分析、HPLC图谱特征对菌株的次级代谢产物进行化学筛选,最终选出海绵真菌Aspergillus aureolatus HDN 14-107作为本论文的研究对象。利用硅胶柱层析、凝胶柱层析、反相、ODS柱色谱层析、Sephadex LH-20凝胶柱色谱层析和MPLC、HPLC色谱分析等化学分离纯化手段,从目标真菌的发酵产物的提取物中共分离得到16个单体化合物。采用质谱、核磁共振谱、红外光谱、紫外光谱、圆二色谱和旋光等多种波谱方法以及计算量子化学等方法阐明了全部化合物的结构,其中包括3个austalides类新化合物。以SRB和MTT法评价了化合物1-16的抗肿瘤活性,结果表明化合物4的抑制率普遍较高,对Hela、HL-60和K562细胞的IC50值分别为27.45、32.33和40.21μM。以MDCK细胞株为模型,评价了化合物1-16的抗H1N1流感病毒活性,结果显示化合物3、5的抑制率分别为60.6%、51.5%,具有较强的抗H1N1流感病毒活性,化合物9、15抑制率分别为35.7%、38.4%,抗H1N1流感病毒活性较弱。综上所述,本论文从22个西沙海绵样品中分离得到98株内生真菌,并对其中1株海绵来源真菌次级代谢产物进行研究,共得到16个单体化合物,包括3个austalides类新化合物。以5种人肿瘤细胞系评价了austalides类化合物的细胞毒活性,并首次发现该类化合物对H1N1流感病毒具有较强的抑制活性。上述研究为天然产物化学研究提供了新的化学结构类型,为筛选抗肿瘤和抗H1N1流感病毒药物先导化合物提供了化合物模板。研究结果表明海绵来源的真菌具有结构新颖活性多样的代谢产物,是重要的药用微生物资源,值得进一步深入开展研究。