论文部分内容阅读
目的MicroRNA（miRNA）是一类内源性非编码RNA小分子，主要通过与靶基因3’非翻译区（3’-untranslated region，3’UTR）结合促进靶基因mRNA降解或抑制其翻译，从而在转录后水平负调控基因表达。最近研究表明miRNA与心血管疾病密切相关。研究发现缺血后血管新生修复过程中miRNA表达谱明显改变，某些特异性的miRNA可调控组织缺血后血管新生。但miRNA-503表达是否参与调节糖尿病心肌梗死后缺血区血管新生形成低下这一发病过程目前鲜有研究报道。本研究通过观察糖尿病大鼠心肌梗死周边缺血区miRNA-503及其靶基因细胞周期素E1（CCNE1）和细胞分裂周期蛋白25A（The cell division cycle25A，cdc25A）不同时间点表达量变化，旨在探讨miRNA-503在心肌缺血区血管新生中可能的调控作用。方法选用雄性SD（Sprague-Dawley）大鼠126只，随机分为两组，2型糖尿病组（T2DM）经腹腔注射10%尼克酰胺（Nicotinamid，NA）（230mg/kg），15min后按65mg/kg尾静脉注射冰浴的1%链脲佐菌素（Streptozocin，STZ，pH=4.5）诱导2型糖尿病。年龄与体重相匹配的非糖尿病大鼠组（NDM）经腹腔注射10%尼克酰胺（230mg/kg），15min后按6.5ml/kg尾静脉注射柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液（pH=4.5）。注射完毕后，普通饲料喂养，定期测定空腹血糖及体重。9周造模成功后，2大组又各分为心肌梗死组（AMI）与假手术组（Sham），所有心梗组（AMI）结扎冠状动脉前降支建立急性心肌梗死模型，假手术组（Sham）只穿线不结扎。4组大鼠分别于假手术或心肌梗死后第3、7、14、28天4个时间点予处死。处死后测量心脏重量指数（heart weight index，HWI）；Masson染色和VIII因子免疫组织化学法分别检测各组心肌梗死面积及缺血区新生血管密度；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测缺血区miRNA-503表达量变化；Western blot检测缺血区CCNE1和cdc25A蛋白表达水平。结果（1）与NDM+AMI组相比，DM+AMI组3天时，心脏重量指数，梗死面积、新生微血管密度，两组相比无明显差异（p>0.05）；而随着时间延长，心脏重量指数逐渐降低（p<0.05），梗死面积扩大（p<0.05）、新生微血管密度减少（p<0.05）。（2）与NDM+Sham组相比，DM+AMI组术后3天miRNA-503开始升高，14天表达量达到高峰、28天后仍持续表达，其上调的倍数分别为2.15±0.29、3.09±0.7、4.18±0.72、3.82±0.55(p<0.01)。（3）随着缺血天数的增加，DM+AMI组缺血区组织各时间点cdc25A表达量显著低于同天数NDM+Sham组，其下调的倍数分别为0.83±0.1、0.77±0.11、0.53±0.09、0.43±0.09(p<0.05)。而DM+AMI组缺血区组织各时间点CCNE1表达量与同天数NDM+Sham组相比，其上调的倍数分别为0.94±0.14、1.1±0.06、0.98±0.16、1.08±0.1（p>0.05）。（4）Spearman秩相关分析结果显示：DM+AMI组缺血区miR-503水平与cdc25A蛋白表达量成负相关（r=-0.748，p=0.005），而与CCNE1蛋白表达不相关（r=-0.245，p=0.443）。结论2型糖尿病大鼠心肌梗死后缺血区miRNA-503表达上调，并在转录后水平抑制其靶基因cdc25A蛋白表达，而非糖尿病大鼠心肌梗死后缺血区miRNA-503及其靶基因cdc25A未见明显变化，此种机制可能是糖尿病心肌缺血后血管新生形成低下的原因之一。