猪圆环病毒2型(PCV2)感染是造成断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要原因，其它协同因素可增强疾病的严重程度。1991年加拿大首次爆发本病，随后世界上许多国家和地区都有本病的报道。本病以断奶仔猪和育肥猪生长缓慢、呼吸急迫、消瘦、贫血和出现黄疸现象等为特征，给养猪业造成严重经济损失。经血清学调查和病毒分离鉴定证实，本病在我国也广泛存在。　　 疫苗是预防此病的主要措施之一。为了有效地预防PCV2感染，本研究利用南京农业大学分离鉴定的PCV2-SH株作为疫苗毒株，进行了灭活苗的研究，为我国预防和控制该病奠定了基础。具体研究内容如下:　　 1.猪圈环病毒2型规模化增殖影响因素研究　　 PCV2体外培养主要采用PK15细胞，本研究对细胞冻存复苏条件、血清、细胞消化传代方法、接毒和收获方法等进行了条件优化，结果为:复苏PK15细胞采用39℃的温水60秒内迅速溶解，细胞存活率最好;冻存细胞加入10％～15％二甲基亚砜，并采取4℃30 min→-20℃2h→-70℃12h→液氮的冻存方法较理想;不同批次的小牛血清对细胞生长影响较大，选择含8％～10％新生血清的DMEM作为细胞生长液，均能保证细胞正常生长;胰酶消化前采用hanks液洗涤细胞，使用1∶4胰酶-EDTA消化液消化，按1∶3-1∶4的比例传代，细胞生长状态良好。采用同步接毒方式，收获的抗原病毒含量最高;每个15L转瓶的种毒接毒量为106.5TCID50最为适宜;病毒细胞维持液采用3％-5％血清的MEM培养基，含毒细胞的生长良好;含毒细胞收获时经-20℃冻融1-3次，病毒含量较高，从而为PCV2灭活疫苗制备提供了依据。　　 2.猪圆环病毒2型灭活与乳化工艺影响因素研究　　 取PCV2培养物用不同浓度甲醛37℃作用24小时，用0.2％浓度甲醛作用不同时间，分别取样用PCR和间接免疫荧光法检测灭活效果，结果为:用0.2％浓度甲醛37℃灭活20小时可完全灭活圆环病毒。用法国进口206佐剂为油相，PCV2 SH株灭活抗原为水相，将油相、水相按54∶46的体积比混合到一起进行乳化，通过对乳化过程中的温度、PH值、搅拌速度、搅拌时间、降温方式等进行试验，然后对成品苗进行乳化效果的检测和判定，结果为:当水相的PH值为8.2，水相、油相温度为32℃，搅拌速度为50HZ,搅拌时间为30分钟时乳化效果最好。将按上述方法乳化合格的3批PCV2灭活疫苗按质量标准进行物理性状和无菌检测，均符合要求。　　 3.猪圆环病毒2型灭活苗安全性与免疫效力试验　　 选择14～21日龄仔猪，用3批灭活疫苗接种，每头肌肉注射疫苗4ml，进行安全性检验，连续观察14日，均无异常临床反应。免疫两次，每次免疫1ml，两周后加强免疫一次，于首次免疫后1、2、3、4周采血，分离血清，用间接ELISA测定PCV2抗体，结果为:3批灭活疫苗免疫猪体后都可以检测到特异性抗体，免疫2周后开始产生抗体，免疫4周抗体水平达到最高，而非免疫组始终未检测到特异性抗体。采用5～6周龄清洁级小白鼠免疫，每只0.2ml，两周后按相同途径和剂量进行第2次接种，首免后5周采血，分离血清，测定血清中PCV2 ELISA抗体，小鼠免疫后抗体平均效价不低于1∶800。