【摘 要】
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由新型冠状病毒感染导致新冠肺炎,在全球范围内发展迅猛,对全人类的生命健康和经济发展造成了严重影响。2020年2月11日,世界卫生组织(WHO)正式将此次流行的肺炎命名为COVID-19(corona virus disease 2019),引起该肺炎的新型冠状病毒由国际病毒分类委员会命名为SARS-CoV-2(severe acute respiratory syndrome coronaviru
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由新型冠状病毒感染导致新冠肺炎,在全球范围内发展迅猛,对全人类的生命健康和经济发展造成了严重影响。2020年2月11日,世界卫生组织(WHO)正式将此次流行的肺炎命名为COVID-19(corona virus disease 2019),引起该肺炎的新型冠状病毒由国际病毒分类委员会命名为SARS-CoV-2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2)。SARSCoV-2与一种蝙蝠冠状病毒(RaTG13)基因序列的相似度高达96%,由此猜测该病毒宿主可能为蝙蝠,但是其明确的起源尚未确定。随着不断研究,有研究结果显示血管紧张素转化酶2(angiotensin-converting enz yme 2,ACE2)是SARS-CoV-2的一个功能性受体,证实了SARS-CoV-2确实是通过ACE2蛋白入侵受体细胞。SARS-CoV-2不仅可以感染人类,还可以感染其他物种,从而可能导致跨物种感染。基于此,所以本研究选取了SARS-CoV-2的可能溯源-野生蝙蝠,在自然界中分布广泛且可能携带大量病原体的野生老鼠,以及由实验室繁育的C57BL/6、BALB/c、树鼩、叙利亚黄金仓鼠,还有在宠物市场购买的花枝鼠、家兔、熊崽仓鼠、三线仓鼠这11个物种,然后分离了这11个物种的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、大脑、结肠、十二指肠、胃和气管这10种组织进行核酸提取。为了获得多物种ACE2基因的编码区全长序列,在NCBI数据库中下载了相关的参考序列,通过设计引物以及PCR扩增得到了多物种的ACE2基因编码区全长序列。经过生物信息学分析,发现多物种与人ACE2基因编码区序列相似性都在84%以上,其中,野生蝙蝠、老鼠和人ACE2基因编码区序列的相似度为84.8%、84.9%,相似度最高的为家兔,达到了88.2%。用人与扩增得到的多物种的ACE2基因编码区全长序列构建分子系统发育树,发现野生蝙蝠(小蹄蝠)和树鼩与人的ACE2基因编码区序列的亲缘关系更相近。本研究还以多物种的ACE2基因的编码区全长序列为模板,通过SWISS-MODEL进行同源建模得到了多物种ACE2的蛋白模型,然后用HADDOCK将得到的多物种ACE2的蛋白模型与SARS-CoV-2 Spike进行对接,再通过Fold X软件计算了对接复合物的蛋白结合能,结果表明人ACE2蛋白与Spike蛋白结合能为-3.82 Kcal/mol,结合能更高的有家兔(-6.05Kcal/mol)、黄金仓鼠和熊崽仓鼠(-5.39 Kcal/mol)、三线仓鼠(-5.16 Kcal/mol)、野生蝙蝠(小蹄蝠)(-4.67 Kcal/mol),说明这几个物种的ACE2蛋白可能较为容易地与SARS-CoV-2 Spike结合。最后,本研究选取了SARS-CoV-2的可能宿主-野生蝙蝠、在自然界中广泛分布的野生老鼠、与野生蝙蝠ACE2基因编码区亲缘关系更相近的树鼩这3个物种,通过q PCR比较了这3个物种的不同组织种ACE2mRNA的相对表达量,还在表达量较高的组织中通过Western Blot验证了ACE2蛋白的表达。结果表明,ACE2 mRNA在这3个物种体的肾脏、消化系统中的表达量更高,而且在这些组织部位均能检测到ACE2蛋白的表达。
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