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脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)是大多数革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分,也称内毒素或热原。不同细菌LPS的结构差异很大,由于布鲁氏菌表面的LPS是非典型的LPS,一旦缺损会严重影响布鲁氏菌在体内外的增殖和生存能力,同时也是布鲁氏菌最重要的表面抗原,成为其诊断方法中主要的标识物。目前诊断布病的虎红平板凝集试验和试管凝集试验包被的抗原有菌体和LPS,但检测方法特异性较差,假阳性高,主观人为判定因素影响大。建立快速、灵敏、特异的布鲁氏菌病检测方法对布病净化至关重要。利用提取纯化的布鲁氏菌标准株16M LPS作为免疫原,分别使用60μg与30μg纯化后的LPS对Balb/c小鼠采用皮下多点注射方式进行初次免疫及加强免疫。经细胞融合、阳性杂交瘤细胞株筛选、腹水制备及纯化后获得两株单克隆抗体,并对其进行效价分析,亚类测定,纯度检测及特异性实验。使用异硫氰酸荧光素(FITC)和量子点(QDs)分别标记布鲁氏菌16M LPS制备荧光标记抗原。对标记的最佳反应体积比、LPS的最佳反应浓度及其影响因素进行确定,并通过荧光光谱法对制备的两种荧光标记抗原的标记效果进行检测。将制备的两种荧光标记抗原作为示踪物,通过确定最佳示踪物浓度、血清最佳稀释度、最佳反应时间、临界值等条件,建立两种布鲁氏菌荧光偏振检测方法。与进口的荧光偏振(FPIA)抗体检测试剂盒对623份牛血清样品及30份羊血清样品进行比对检测,比较方法的特异性、快速准确性和符合率。获得了两株分泌抗布鲁氏菌16M LPS单克隆抗体的细胞株,抗体效价分别为1:6 400和1:12800;亚类分别IgG3和IgG1,轻链类型均为κ型;纯度大于90%;均可以识别布鲁氏菌A、M抗原位点;均可与标准试管凝集抗原形成明显的凝集物,命名为Anti-A-LPS:5和Anti-A-LPS:10。制备的两种荧光标记抗原FITC-LPS与QDs-LPS的最大荧光发射波长分别为524nm和624nm,与单独的FITC及QDs的最大荧光发射波长相比均偏移了 4nm;QDs标记LPS时,二者的最佳体积比为1:5,LPS的最佳浓度为300ng/mL;FITC-LPS与QDs-LPS分别与布鲁氏菌标准阳性血清及获得的两株单克隆抗体反应,其FP值均发生较明显的变化。分别使用FITC-LPS和QDs-LPS作为荧光标记抗原,确定了最佳示踪物浓度分别为1:1 500和1:2 000;最佳反应时间分别为5min和4min;临界值分别为101mP和84mP;敏感性分别为88.9%和93.4%;特异性分别为96.6%和89.8%;与进口 FPIA抗体检测试剂盒的检测结果相比较,对牛血清样品检测的总符合率分别为94%和89%;对羊血清样品检测的总符合率分别为93%和90%。本实验获得了两株效价高,纯度好,敏感性高,反应原性强的抗羊种布鲁氏菌16M LPS单克隆抗体;建立了两种快速、灵敏、便捷、重复性高、可实现高通量检测、可通过具体的荧光偏振数值对待检的血清样品进行定性及定量分析、适用于临床样本检测的布鲁氏菌荧光偏振抗体检测方法;与进口 FPIA抗体检测试剂盒的检测结果相比较,对羊血清样品的阳性检出率高于进口 FPIA抗体检测试剂盒。研究成果可以为后续进一步建立布鲁氏菌荧光偏振病原检测方法奠定实验基础。