不同质量浓度阿仑膦酸钠对大鼠颅骨极限骨缺损修复的影响

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实验目的:探讨缓释阿仑膦酸钠(alendronate, ALN)对大鼠颅骨极限全层骨缺损修复的影响及其不同质量浓度ALN对骨修复的关系,为临床应用提供实验依据。实验方法:选取三月龄健康雄性SD大鼠20只。使用40g/l水合氯醛(10ml/kg体重)腹腔注射麻醉。俯卧位固定于手术板上,剪除术区毛发,碘伏消毒,自眼眶后缘至耳后缘沿正中线剪开皮肤、皮下组织,充分暴露术区,剪开并剪除术区骨膜。在无菌生理盐水冲洗的情况下,用牙科低速马达在每只大鼠颅顶骨做4个5mm直径极限全层骨缺损,勿损伤硬脑膜,缺损之间间隔2-3mm,各缺损分别给予填充含ALN0mg/g(A组)、1mg/g (B组)、2mg/g(C组)、4mg/g(D组)的纳米羟基磷灰石-阿仑膦酸钠(nanohydroxyapatite-alendronate, nHA-ALN)复合材料的处理,高度与缺损边缘平齐,提拉皮肤,严密缝合(见附图)。术后常规使用青霉素1万U/d,连续三天。于术后2周、4周、8周、12周分别以麻醉过量的方式随机处死5只大鼠,保留缺损周围2mm的正常骨组织,完整切取颅顶骨。将取下的颅顶骨用自来水冲洗,去净血污和软组织,然后颅骨标本固定处理48h,再用牙科X射线机拍摄每个颅顶骨X线片,并采用Image-proplus6.0软件对所得X线片进行分析,计算剩余缺损面积。然后所有标本经冲洗和脱钙,常规梯度脱水、包埋,制作HE染色切片、观察。用Image-proplus6.0软件对HE切片图像分析,计算新生骨组织所占视野比例。实验组和对照组结果用均数士标准差(即x士s)的形式表示,采用SPSS13.0统计软件对实验结果进行析因设计方差分析和单因素方差分析,设定p<0.05时有统计学意义。实验结果:1、大鼠于术后1小时后完全清醒,活动、饮食正常,无死亡或感染,切口一周后I期愈合,缝线自行脱落。2、x线片结果分析显示,术后2周各组剩余缺损面积之间的差异无统计学意义(p>0.05),各组数据较为接近;术后4周,组间差异有统计学意义(p<0.05),C组明显优于其他组;术后8周和术后12周,组间差异无统计学意义(p>0.05)但是从数据上观察C组明显优于其他各组。3、术后2周,各组出现少量新生骨组织,缺损被软组织充填。术后4周,缺损中的纤维组织发生骨样改变,成为未成熟骨组织,大量新生血管出现,以C组最多见。术后8周,新生骨融合成片,新生骨组织逐渐成熟。术后12周,缺损继续愈合,骨髓腔及骨皮质的改建。新生骨占视野百分比数据分析,结果同X线片结果分析。实验结论:1、ALN对于骨缺损早期(术后2周)的修复活动没有显著的影响。2、骨的修复活动在术后4周最活跃,ALN对骨缺损的修复有一定的促进作用。3、不同质量的ALN对骨缺损的修复有不同的影响,ALN质量浓度为2mg/g的nHA-ALN材料可以明显地促进骨缺损的修复。4、nHA-ALN或可成为临床上骨缺损修复的材料之一。
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