背景:非酒精性脂肪性肝病（Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD）已成为世界范围内日益严峻的公共卫生问题,目前缺乏安全有效的治疗手段。NAFLD属于中医“肝癖”的范畴,湿热蕴结是NAFLD的主要中医证型之一。根据痛风的临床特点,可归属于中医学“痹证”范畴,NAFLD与痛风具有相同的证型-湿热蕴结型。四妙方（SMF）出自《成方便读》,功效清热利湿,是治疗痛风、痹症的经典方剂,研究表明其具有良好的降尿酸的作用。近年来研究认为高尿酸血症是NAFLD的独立危险因素。尿酸可以诱导胰岛素抵抗和炎症反应,增加肝脏脂质蓄积,故降尿酸治疗可能作为治疗NAFLD的潜在靶标。异病同治是中医学的基本治则,是针对不同疾病的相同证候或病因病机所采用相同的治疗方法,基于NAFLD与痛风具有相同的证型-湿热蕴结,以及两者共有的高尿酸病理学基础,本课题选择四妙方治疗NAFLD,并探讨其可能的作用机制。基于中医异病同治的治则,以降尿酸为靶标,选用四妙方防治NAFLD,但四妙方对于NAFLD的物质基础、潜在靶点不明确,药效作用不清楚。另一方面,从尿酸的代谢过程,包括肠道菌对尿酸的分解作用,探索四妙方能否通过降尿酸作为防治NAFLD的实验支持。目的:1.探索四妙方是否具有防治NAFLD的作用。2.从糖脂代谢、炎症、尿酸代谢与肠道菌群的角度探讨四妙方防治NAFLD的潜在机制。方法:1.通过TCMSP、BATMAN-TCM等数据库检索四妙方中药物的主要化合物,去除重复成分,并根据OB≥30%、DL≥0.18确定入选活性化合物。通过检索TCMSP、BATMAN-MAN数据库预测靶标。通过STRING数据库对靶标做归一化处理。通过Genecards、DisGeNET等靶点数据库,筛选NAFLD疾病靶标;将四妙方预测化合物靶标和NAFLD疾病靶标库进行映射。采用Cytoscape3.7.1构建药物-物-疾病-靶标网络图,并使用相关插件对网络拓扑参数进行分析。通过STRING对靶标进行PPI网络构建与分析,通过DAVID数据库进行靶标的GO和KEGG预测与分析,进一步预测四妙方防治NAFLD的生物学机制。2.采用超高效液相色谱-质谱联用方法（UPLC-Q-TOF/MS）对四妙方水提液进行分析,通过比较每个离子峰的准确分子量,保留时间和次级质谱特征来鉴定四妙方的化学成分。3.采用4周龄的雄性C57BL/6J小鼠使用高糖高脂饮食（高脂饲料联合30%的蔗糖水,质量/体积）16周,诱导NAFLD小鼠模型,同时予四妙方灌胃,高剂量（生药量20g/Kg）和四妙方低剂量（生药量10g/Kg）。给药13周后,腹腔注射葡萄糖行葡萄糖耐量实验,后间隔1周后,予以腹腔注射胰岛素行胰岛素耐量实验。给药防治16周后,所有动物予以麻醉采血,摘取各组组织的白色脂肪、褐色脂肪、盲肠内容物、肝脏、肾脏组织、褐色脂肪组织等。观察小鼠肝脏、白色脂肪组织病理,检测血清TC、TG、LDL、HDL、AST、ALT。4.采用qRT-PCR检测肝脏糖脂代谢与炎症相关指标,白色脂肪组织炎症与能量代谢相关指标。5.检测血清尿酸、结肠内容物尿酸水平,检测肝脏尿酸生成关键酶基因及蛋白的表达,肾脏与回肠尿酸转运体与回肠ZO-1,OccludinmRNA的表达。6.提取小鼠盲肠内容物细菌总DNA,在Illumina MiSeq平台上对盲肠微生物群16S rRNA基因扩增子的V3-V4区进行了测序,获取原始数据后进行整理、分析,评价四妙方对NAFLD小鼠肠道菌群的影响。7.将C57BL/6J雄性小鼠予以高糖高脂饮食及高糖高脂饮食联合四妙方作为供体组,持续16周,4周龄的雄性C57BL/6J雄性小鼠接受不同组别的供体小鼠粪便,行粪菌移植14周后,检测盲肠内容物,肝脏样本及肠道菌群结构。结果:1.网络药理学:共预测四妙方中活性成分57个,靶标基因预测排名前15的通路中,调控的通路包括:胰岛素信号、TNF信号通路、Toll样受体及NAFLD信号通路,其中在NAFLD通路中,调控的靶标有PPARA、IL6、TNF、RELA、NFKB1、TGFB1、AKT1、CASP3、GSK3B、JNK、BAX、CASP8、MAPK8、KBKB、INSR 与 IL1A。2.采用UHPLC-Q-TOF/MS对四妙方提取液中的化学成分进行分析鉴别,共鉴定出四妙方中30个化学成分,主要为4类,包括:生物碱类,三萜类,有机酸类,甾酮类化合物等。3.利用高糖高脂造模16周建立NAFLD小鼠模型,在此基础上,四妙方干预后（高、低剂量）可降低小鼠体重、肝重;四妙方高剂量组显著降低白色脂肪重量及白色脂肪指数;四妙方显著降低小鼠血清中的TC、LDL、AST、ALT,同时降低肝脏TG水平。肝脏HE染色显示:在模型对照组中,肝组织可见空泡样变性、炎性细胞浸润,而四妙方组中肝组织脂肪变性、炎性细胞浸润较模型对照组均有一定程度缓解。白色脂肪组织HE染色:模型对照组白色脂肪脂肪细胞明显增大,含有较大的脂滴,四妙方中白色脂肪组织颜色变深,脂肪细胞内的脂滴变小。4.四妙方对NAFLD小鼠胰岛素抵抗、糖脂代谢、炎症指标:与空白对照组相比,模型对照组小鼠GTT、ITT曲线下面积显著升高,四妙方低剂量组小鼠GTT、ITT曲线下面积显著降低。四妙方组显著降低肝脏ACLY,ACC,FAS,SCD-1 mRNA水平,四妙方组显著抑制肝脏CD36,DGAT-2,NLRP3,IL-1α,JNK mRNA 的表达。5.四妙方可降低血清尿酸水平,升高结肠内容物中尿酸水平,肝脏尿酸合成的关键酶-黄嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase,XO）及促进尿酸分解的尿酸酶（Uricase）各组间无统计学差异。肾脏尿酸分泌转运体:四妙方干预后降低肾脏MRP4 mRNA的表达。四妙方对肾脏尿酸重吸收URAT1 mRNA的表达无统计学差异,检测肾脏尿酸排泄ABCG2,PDZK-1 mRNA,四妙方干预后肾脏PDZK-1 mRNA的表达显著升高。6.四妙方对NAFLD小鼠肠道菌的影响:模型对照组与四妙方干预都导致小鼠肠道菌群结构发生了改变:与空白对照组相比,模型对照组OTUs数量降低,与模型对照组相比,四妙方组OTUs数量亦降低。α多样性表现为:四妙方组sobs、shannon指数显著降低,而chao指数降低无统计学差异,且Simpson指数显著升高。β多样性分析:使用unweightedunifrac距离算法进行PCoA分析,三组间的菌群结构具有显著差异。四妙方可显著升高Verrucomicrobia（疣微菌门）,Verrucomicrobiae（疣微菌纲）Verrucomicrobiales（疣微菌目）,Akkermansiaceae（疣微菌科）,显著增加益生菌Akkermansia muciniphila的丰度。7.四妙方粪菌移植实验结果显示:通过四妙方菌群的移植可降低小鼠体重增长,四妙方粪菌移植实验肠道菌群结果:在科水平降低Erysipelotrichaceae的丰度,增加Bacteroidaceae的丰度。结论:1.证实四妙方对NAFLD的防治作用。2.四妙方改善小鼠糖脂代谢,发挥潜在的肝脏保护作用,减轻NAFLD的病理改变。3.四妙方可抑制肝脏脂肪酸合成途径,抑制机体炎症反应。四妙方降低血清尿酸水平,促进肾脏尿酸排泄,增加粪便尿酸排泄。4.四妙方防治NAFLD的作用可能与调节肠道菌群结构及显著增加益生菌Akkermansia muciniphila的丰度相关。5.FMT实验表明:四妙方喂养小鼠的肠道细菌抑制HFD喂养小鼠的体重增长。