【摘 要】
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[目 的]目前国内外关于miRNA-186-5p对PCa的发生发展及作用机制鲜有研究,本研究将通过一系列细胞功能试验,探索miRNA-186-5p对PCa增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响,并明确其与下游靶基因CALB1的相关性,进而分析抑制Pca生物学行为的可能机制,为PCa的诊断和治疗提供新的靶点和方向。[方法]1.基于生物信息学分析筛选miRNA及下游靶基因,并在10对前列腺癌患者的前列腺癌组
【基金项目】
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云南省医学领军人才项目（L-2018009）； 国家自然科学基金（81972395）； 国家自然科学基金（82160583）；
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[目 的]目前国内外关于miRNA-186-5p对PCa的发生发展及作用机制鲜有研究,本研究将通过一系列细胞功能试验,探索miRNA-186-5p对PCa增殖、凋亡、迁移、侵袭能力的影响,并明确其与下游靶基因CALB1的相关性,进而分析抑制Pca生物学行为的可能机制,为PCa的诊断和治疗提供新的靶点和方向。[方法]1.基于生物信息学分析筛选miRNA及下游靶基因,并在10对前列腺癌患者的前列腺癌组织和癌旁组织中,通过免疫组化和qRT-PCR实验检测miRNA和下游靶基因的相对表达情况。2.通过qRT-PCR实验检测筛选出来的miR-186-5p在前列腺癌细胞中的表达情况。3.在选定的前列腺癌细胞株中转染对照质粒（NC）、miR-186-5p过表达质粒（mimics）及沉默表达质粒（inhibitor）,通过qRT-PCR实验检测转染效率。设立 NC 组、miR-186-5p mimics 组和 miR-186-5p inhibitor 组共 3 个分组,通过 CCK8增殖实验、流式细胞术、transwell迁移侵袭实验等体外细胞功能实验探究miRNA-186-5p对PCa细胞生物学行为的影响。4.构建3种si-CALB 1,通过qRT-PCR实验和Western blot实验筛选最佳的si-CALB1。在选定的前列腺癌细胞株中共转染si-CALB1+miR-186-5p inhibitor,通过qRT-PCR实验和Western blot实验检测miR-186-5p对CALB1表达的影响。5.设立 nc 组、si-CALB1 组和 si-CALB1+miR-186-5p inhibitor 组 3 个分组,进行细胞回复实验,探究miR-186-5p是否直接靶向CALB1,进而影响前列腺癌细胞的生物学行为。[结 果]1.通过生信分析发现miR-186-5p的表达在前列腺癌中显著降低,并确定了CALB1为miR-186-5p的下游靶基因。随后的免疫组化和qRT-PCR结果也验证了上述生信分析结果。同时,相关性分析显示,miR-186-5p与CALB1呈负相关。2.qRT-PCR结果显示,与WPMY-1相比,前列腺癌细胞22RV1和DU145中miR-186-5p的表达显著降低,且具有统计学意义。3.在22RV1和DU145两种细胞株中均成功过表达和沉默表达miR-186-5p,并以此为基础进行了一系列细胞功能实验,结果显示,miR-186-5p可显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,并促进前列腺癌细胞的凋亡。4.成功构建并筛选出最佳si-CALB1,而且当同时敲低miR-186-5p和CALB1后,CALB1的表达水平又重新恢复。5.通过一系列细胞回复实验发现,miR-186-5p可靶向调控CALB1的表达,进而抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,并促进前列腺癌细胞的凋亡。[结 论]1.miR-186-5p在前列腺癌中低表达,而CALB1在前列腺癌中高表达,两者呈负相关。2.miR-186-5p可显著抑制前列腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭,并促进前列腺癌细胞的凋亡,起到抑癌作用。3.miR-186-5p通过靶向调控CALB1的表达,进而影响前列腺癌的生物学行为。
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