论文部分内容阅读
目的建立亚急性衰老小鼠模型,通过Y-型迷宫实验观察衰老小鼠学习记忆行为能力的改变,紫外分光光度法检测大脑和血清酶学变化,光学显微镜法观察衰老小鼠大脑海马组织形态结构的变化等手段,评价药膳-开窍益智方对亚急性衰老小鼠学习记忆功能、大脑和血清中相关物质的含量或活性以及大脑海马组织神经元细胞形态的改善作用,并探讨其可能的作用机理。方法选用4月龄ICR成年鼠78只。适应性饲养一周后,先用Y-型迷宫筛选,按90%区间淘汰7只,剩余71只随机分成6组,即空白对照组(10只)、模型对照组(11只)、阳性对照组(11只)、药膳组(低、中、高剂量组,各13只)。空白对照组与模型对照组每日上午以蒸馏水0.3mL/只灌胃；药膳组(低、中、高剂量组)每日上午分别灌服开窍益智汤0.1mL0.2mL、0.3mL/只；阳性对照组每日上午分别以003mg/mL的石杉碱甲(Huperzine A,SSJJ)0.4mg/kg灌胃,连续42天。空白对照组每日下午以0.86%的生理盐水0.2ml/只腹腔注射,其余各组以25mg/mL的D-半乳糖(D-galactose,D-gal)200mg/kg腹腔注射,同时以18.75mg/mL的三氯化铝(Aluminum chloride, AlCl3)150mg/kg灌胃,连续42天。各组(除空白对照组注射生理盐水外)于动物实验第36-42天进行的行为实验前20min腹腔注射氢溴酸东莨菪碱(Scopolamine,SCOP)2mg/kg,实验时用Y-型迷宫装置测试学习记忆能力。而后摘取小鼠眼球取血、分离血清；然后处死小鼠,分离脑组织,每组随机选取两只小鼠脑组织摘取其海马组织用福尔马林固定,其余脑组织用于制作10%脑组织匀浆。用紫外分光光度计法分别检测脑匀浆和血清的丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AchE)活性；海马组织石蜡包埋制作切片,光学显微镜下观察大脑海马区的神经元数目及形态结构变化。结果经实验证明：模型对照组小鼠完成学习所需要的次数显著增多、对信号判别正确反映率显著降低；大脑重量显著下降,脑组织总蛋白含量显著降低,脑匀浆和血清MDA含量显著增多、SOD活性显著下降、AchE活性显著升高；模型对照组小鼠大脑海马组织石蜡切片显示：海马组织轮廓模糊,神经元细胞分支减少,核仁浓缩变小,分叶不清,有断离,且有大量肿胀变性的神经元细胞,细胞排列松散,细胞间界限模糊。与模型对照组相比,开窍益智方高、中剂量组上述各项指标有极显著性差异(p<0.01),且与药物剂量呈正相关；开窍益智方低剂量组与模型模型对照组比较有改善趋势,但差异无显著性(p>0.05)；模型对照组与空白对照组差异有极显著性(p<0.01),与阳性对照组相比差异亦有显著性p<0.05)。与空白对照组相比,开窍益智方中剂量组与其最接近,差异无显著性(p>0.05)。结论(1)联合使用D-ga、AlCl3和SCOP可成功诱导复制出学习记忆功能障碍的衰老小鼠模型。(2)开窍益智方对衰老小鼠学习记忆功能具有改善或促进作用。(3)开窍益智方能降低AchE活性,该作用与改善记忆功能有关。(4)开窍益智方对衰老小鼠具有增强SOD活性、增强抗氧化损伤的活力。(5)开窍益智方可抑制衰老小鼠脂质过氧化产物的生成。(6)开窍益智方可减轻神经元细胞在衰老时的退行性改变,对神经元细胞具有保护作用。