【摘 要】
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植物由于受到外界环境胁迫的刺激,导致机体产生氧化胁迫,从而影响植物的生理生化特性和代谢途径。过氧化物酶(Px)在植物胁迫应答、防御反应和生长发育过程中具有重要的作用。
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植物由于受到外界环境胁迫的刺激,导致机体产生氧化胁迫,从而影响植物的生理生化特性和代谢途径。过氧化物酶(Px)在植物胁迫应答、防御反应和生长发育过程中具有重要的作用。本论文以烟草为材料,从中克隆得到编码过氧化物酶基因的新成员Ntpx,并对其性质做了初步分析。本论文获得如下主要研究结果:(1)从烟草中克隆得到编码过氧化物酶基因的新成员Ntpx,其开放阅读框长990bp,能够编码329个氨基酸残基,具有一个典型的peroxidase-4结构域。(2)Ntpx在成熟烟草植株各器官的表达水平从高到低依次为花、茎、叶和根。(3)Ntpx基因的表达不仅受到低温、ABA、MeJA、GA的显著诱导;也受到高温、SA的较显著诱导,受到ET、干旱诱导调控不显著;Ntpx基因在高温、低温、盐害和SA、GA、ABA、ET、MeJA的调控下,都表现为先升后降,再升再降的上调表达模式,但在干旱胁迫中的呈现先升后降的上调模式。(4)通过构建pBI121-Ntpx-GFP载体,转化至农杆菌并侵染洋葱表皮观察细胞定位,结果表明,Ntpx主要定位在核上。(5)通过构建pET30a(+)-Ntpx-GFP载体,转化至大肠杆菌BL21中进行表达,结果表明表达产物Ntpx具有过氧化物酶活性,且其在30℃,200 rpm/min下振荡,0.05mmol/L IPTG诱导10h表达的Ntpx具有较高的比活力,其酶比活力为8.617 U.g-1.min-1。上述研究结果为进一步系统分析Ntpx在烟草中的重要生物学功能及其分子机制奠定基础。
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