水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)可引起水稻条纹病,是温带和亚热带稻区重要的水稻病害。RSV主要由灰飞虱以持久性循回增殖方式传播。RSV具有丝状核糖核蛋白颗粒(RNP),包含四个编码7种蛋白质的单链RNA,其中非结构蛋白RSV NS3是带毒灰飞虱中最丰富的转录本。RSV NS3被认为可以参与抑制植物和昆虫载体中的宿主免疫反应。为研究RSVNS3在病毒传播过程中的作用,本实验室前期已经成功构建了带毒灰飞虱cDNA文库,利用pGBKT7-NS3诱饵载体从带毒灰飞虱文库中筛选出与其互作的蛋白质,发现RSVNS3与α-微管蛋白存在明显的互作。本文通过酵母双杂交、RNAi、免疫荧光共聚焦、Western Blot等技术研究灰飞虱α-微管蛋白与RSV NS3互作对病毒传播的影响,为揭示灰飞虱传播持久性循回增殖型病毒RSV的机制提供依据。主要研究成果如下:(1)通过酵母双杂交和pull-down验证了 LsTUB与RSV NS3的直接相互作用,并发现它们在唾液腺、中肠和卵巢中共定位。随后的Q-PCR和Western Blot实验表明,抑制LsTUB的表达会导致RSV在mRNA水平和蛋白水平的下降。这些结果进一步表明了 LsTUB与RSV互作,在RSV传播中具有重要功能。(2)通过酵母双杂交验证RSV NS3与TUB的互作位点,发现NS3和LsTUB的结合位点74-76和80-82位的氨基酸残基,为NS3自身互作和沉默抑制子活性区域。进一步通过BiFc实验检测烟草中RSV NS3沉默抑制活性,明确LsTUB的存在并不影响RSV NS3的沉默抑制活性。Sf9细胞中,RSV侵染后24小时内,LsTUB并不会影响RSV的有效复制。但是,沉默LsTUB后显著地阻碍了 RSV从最初感染的中肠细胞扩散到SBPH的唾液腺中。综上所述,TUB在RSV由中肠向唾液腺扩散传播的过程中起重要作用。由dsLsTUB引起的RSV病毒粒子积累和传播效率的降低直接是由SBPH中RSV传播较慢引起的。这些研究为阐述植物病毒和介体之间相互作用提供依据,并且有可能为研发水稻条纹病毒防治的新途径提供指导。