胃癌的发病率和死亡率均列居我国恶性肿瘤第二位,90%的临床患者发现时已属于进展期,对癌前病变进行密切的监测并及时有效的阻断是防治胃癌的关键。慢性浅表性胃炎-慢性萎缩性胃炎（Chronic atrophic gastritis,CAG）-肠上皮化生（Intestinal metaplasia,IM）-异型增生（Dysplasia,DYS）-胃癌是临床公认的疾病演变过程,胃癌的癌前病变（Precancerous Lesions of Gastric Cancer,PLGC）指的是 CAG 的基础上伴发 DYS 或胃上皮内瘤变（Gastric Intraepithelial Neoplasm,GIN）。中医药在防治PLGC上具有独特优势,在胃镜作为疾病评价标准的前提下,发现中医药能降低癌前病变的发生率甚至逆转癌前病变。中医病机认识方面,CAG初起多表现气机壅滞、“气有余便是火”,气机不利,日久化热,导致脾胃湿热之证,若失治误治,病久蕴结成毒,形成了癌前病变。其中因热生毒是癌前病变的核心病机,血瘀贯穿疾病始终。通过30余年的临床实践,李志红教授课题组发现上述瘀毒病机与癌前病变的演变密切相关:基于此,前期临床初步研究发现参白颗粒（太子参、柴胡、紫苏梗、白花蛇舌草、生薏苡仁、莪术）,以理气活血解毒法治疗PLGC,治疗后病理表明胃黏膜水肿明显减轻,黏膜炎性细胞浸润显著减少,部分患者实现了从癌前病变到慢性萎缩性胃炎的疾病逆转。在癌前病变的作用机制方面,长期慢性炎症刺激导致炎-癌转化的发生是其重要机制之一,而细胞焦亡则是细胞炎症性死亡,与胃癌前病变发生关系密切,细胞在焦亡后会释放大量促炎因子并形成细胞膜孔洞,从而启动机体的炎症反应,引起炎症风暴。大量的炎性细胞因子以及活性介质充斥于组织微环境,最终导致细胞恶性转化而产生胃黏膜肠上皮化生、异型增生,该过程与中医因热生毒病机有相似之处,因此我们提出参白颗粒治疗癌前病变是否通过抑制细胞焦亡实现的假说。基于此,本课题分为两部分,第一部分临床研究,探讨参白颗粒治疗慢性萎缩性胃炎癌前病变的临床疗效;第二部分细胞研究,深入挖掘参白颗粒通过干预细胞焦亡从而抑制炎-癌转化的作用机制。研究目的一、临床部分:通过证侯量表、胃镜及病理组织学评价方式,明确参白颗粒治疗慢性萎缩性胃炎癌前病变的临床疗效;二、细胞实验部分:利用LPS（Lipopolysaccharide,脂多糖）刺激人胃黏膜上皮细胞（GES-1）构建细胞炎症模型,并通过细胞转染技术,分别构建NLRP3过表达质粒模型及沉默质粒模型。通过观察各组细胞焦亡通路相关指标NLRP3、Caspase-1、GSDMD、p65、IL-18、IL-1β的变化情况,探索参白颗粒通过细胞焦亡通路阻断CAG炎癌转化过程的作用机制。研究方法一、临床部分:收集符合纳入标准的病例60例,采用自身前后对照方法,根据CAG伴异型增生时期特点制定病例报告表,记录入组前临床基本信息,中医证候学资料以及病理组织学检查结果,参白颗粒干预12周后,再次收集以上资料,根据症状积分及病理组织学积分标准,分别对患者疗前疗后情况进行赋值并计算总积分,通过统计学手段分析治疗前后的差异性,同时综合症状、胃镜及病理组织学改善情况,以此评判参白颗粒治疗CAG癌前病变的临床疗效。二、细胞实验部分:采用LPS诱导GES-1细胞,构建炎症模型,同时采用pcDNA3.1质粒构建NLRP3过表达模型,采用siRNA构建NLRP3沉默模型。实验分为8组:正常组、模型组、过表达组、过表达+中药组、空载体组、沉默组、沉默+中药组、MOCK组（仅加入转染试剂的空白对照组,以下简称为MOCK组）。采用Western Bolt法检测各组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、p65蛋白表达情况;采用ELISA法检测各组IL-18、IL-1β表达量。通过细胞焦亡相关指标表达水平的变化,探索参白颗粒干预细胞焦亡从而阻断炎癌转化的分子机制。研究结果第一部分临床研究:一、一般情况调查结果:本研究纳入慢性萎缩性胃炎轻度异型增生患者总共60例,其中男性29例,女性31例。年龄最大69岁,最小为37岁,平均年龄54.93±8.51岁;男性平均年龄56.55±7.60岁,女性平均年龄53.42±9.15岁。不同年龄性别之间分布无统计学差异。本研究所调查的患者中焦虑忧虑是最主要的精神因素,共有35例（58.33%）。饮食因素方面:患者饮食以偏食油腻为主,共有39例（65.00%）。本研究中所调查的患者就诊季节以冬季居多,共有26例（43.33%）。对烟酒史调查方面:无烟酒史者居多,有32例（53.33%）,饮酒史者次之,21例（35.00%）,吸烟史者最少,14例（23.33%）。二、临床疗效评判结果:首先,本研究借助病例调查表对入组患者治疗前与治疗后症状改善情况进行记录,结果:治愈2例,占3.33%,显效5例,占8.33%,有效43例,占71.67%。无效10例,占16.67%。总有效率83.33%。参白颗粒干预后症状积分均较治疗前下降,差异具有统计学意义。Hp感染情况治疗后较治疗前下降,差异具有统计学意义。病理积分治疗后均较治疗前降低,病理程度较前减轻,且差异均有统计学意义。综上,通过临床症状、胃镜与病理改善情况综合判定参白颗粒治疗CAG癌前病变具有很好的疗效。第二部分细胞实验研究:一、与空白组相比,LPS诱导的GES-1细胞炎症模型中,NLRP3、GSDMD、Caspase-1、p65、IL-18、IL-1β的表达水平均增加,提示炎症模型构建成功,LPS可以引起细胞焦亡相关炎症因子表达水平的升高。二、与模型组相比,过表达组 NLRP3、GSDMD、Caspase-1、p65、IL-18、IL-1β 的表达水平均增加,沉默组NLRP3、GSDMD、Caspase-1、p65、IL-18、IL-1β表达水平均下降,提示NLRP3基因的过表达和沉默能够调控细胞焦亡通路相关蛋白的表达水平以及下游的炎症因子水平。三、与过表达组相比,过表达+中药组NLRP3、GSDMD、Caspase-1、p65、IL-18、IL-1β表达水平均有下降,提示参白颗粒中药能降低细胞焦亡产生的炎症反应,保护胃黏膜上皮细胞。四、与沉默组相比,沉默中药组 NLRP3、GSDMD、Caspase-1、p65、IL-18、IL-1β表达水平无明显趋势,结果提示NLRP3基因沉默后,参白颗粒不能降低细胞焦亡相关蛋白的表达水平,这说明参白颗粒确实能通过细胞焦亡通路调控炎症反应,起到保护胃黏膜,延缓“炎-癌”转化的作用。研究结论一、本病发病的性别与年龄之间无明显差异,萎缩、肠化分级与性别分布之间也无明显统计学差异。患者精神因素在于焦虑忧虑,饮食偏嗜油腻者居多,冬季是患者就诊的高频季节,另外,饮酒也可能是造成本病发病的病因之一。二、通过治疗前后症状积分、胃镜病理积分统计分析可见,“因热生毒”理论指导下的参白颗粒治疗CAG癌前病变患者疗效可靠。三、通过细胞实验研究发现,参白颗粒可以减轻LPS诱导的GES-1细胞炎症程度。通过NLRP3过表达与沉默模型的构建,发现参白颗粒确实能通过NLRP3细胞焦亡通路发挥抗炎、阻断“炎-癌”转化的作用。