论文部分内容阅读
研究背景:痛风是血尿酸水平升高致尿酸盐(monosodium urate,MSU)晶体沉积于组织或器官并伴随组织损伤的一组临床综合征。高尿酸血症是痛风发生的生化基础。痛风急性炎症反复发作且可自发缓解是其区别于其他炎性疾病的特征之一。自噬是一种高度保守的分解代谢机制,通过诱导受损细胞成分与溶酶体融合来介导其降解,维持内环境稳态。自噬参与痛风的发生发展,目前的研究主要集中在自噬参与NLRP3炎性体、NF-κB p62信号通路和炎症介质IL-1β。因此,我们希望从自噬上游通路中寻找影响自噬功能从而参加痛风炎症调节的相关靶标。ATG16L1-ATG12-ATG5复合体在自噬体的形成阶段发挥着重要作用。但是,ATG16L1-ATG12-ATG5复合体在痛风患者外周血单个核细胞中的表达情况以及临床意义尚不清楚。目的:明确 Beclin 1、ATG16L1、ATG12、ATG5、LC3B 在原发性痛风性关节炎(gouty arthritis,GA)患者炎症不同阶段中的表达情况,初步探讨其在痛风患者中的表达情况及其临床意义,为痛风精准治疗提供理论基础。材料与方法:(1)收集2018年9月—2019年9月在川北医学院附属医院风湿免疫科门诊和住院的原发性痛风患者61例的临床资料以及实验室检查指标,其中痛风急性期(acut gout,AG)组患者30例,痛风间歇期(intercritical gout,IG)组患者31例,所有入组患者均符合1977年美国风湿病学会制定的痛风诊断标准。同期川北医学院附属医院的48例健康体检者(healthy control,HC)纳入健康对照组,收集三组人群的临床资料以及实验室检查指标;收集三组研究对象的外周血并提取外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs);(2)实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测三组研究对象 PBMCs 中 Beclin 1、ATG16L1、ATG12、ATG5、LC3B mRNA的表达水平;(3)Western Blot检测三组研究对象PBMCs 中 Beclin 1、ATG16L1、ATG12、ATG5、LC3B 的蛋白表达水平。(4)统计分析采用SPSS20.0统计软件包和GraphPad Prism 6进行分析统计,采用Mann-Whitney非参数检验组间比较上述基因mRNA在三组的表达差异,采用方差分析比较上述基因蛋白水平在三组的表达差异,采用Spearman相关性分析上述基因与痛风患者临床指标之间的相关性。结果:1.与健康对照组相比,痛风患者的白细胞、中性粒细胞、单核细胞、尿酸、血肌酐、球蛋白、甘油三酯、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、超敏C反应蛋白等的水平明显升高,高密度脂蛋白胆固醇的水平降低,高血压、糖尿病的发生率明显增高。2.自噬基因转录水平在三组研究对象中的表达情况:(1)Beclin1 mRNA的表达水平在三组研究对象之间的差异均无统计学意义,0.015(0.01)vs0.022(0.01)vs0.020(0.01),P>0.05。(2)ATG16L1 mRNA的表达水平在AG组、IG组均明显低于HC组,0.0029(0.00)vs0.0051(0.00)vs0.0106(0.01),P均<0.01,AG组和IG组之间差异无统计学意义,P>0.05。(3)ATG12 mRNA的表达水平在AG组、IG组均明显低于 HC 组,0.0186(0.01)vs0.0206(0.02)vs0.0336(0.04),P均<0.05,AG组和IG组之间差异无统计学意义,P>0.05。(4)ATG5 mRNA的表达水平在AG组、IG组均明显低于HC组,0.0152(0.01)vs0.0159(0.01)vs0.0296(0.04),P均<0.01,AG组和IG组之间差异无统计学意义,P>0.05。(5)LC3B mRNA的表达水平在AG组低于IG组和HC组,0.003(0.00)vs0.003(0.00)vs0.004(0.00),P均<0.05,IG 组和HC组之间差异无统计学意义,P>0.05。3.自噬基因蛋白水平在三组研究对象中的表达情况:(1)Beclin1蛋白水平在AG组的表达低于IG组和HC组,P均<0.05,IG组和HC组之间差异无统计学意义,P>0.05。(2)ATG16L1蛋白水平在AG和IG组的表达均低于HC组,P均<0.05,在AG组的表达低于IG组,P<0.05。(3)ATG12蛋白水平在AG组和IG组的表达低于HC组,P均<0.05,AG组和IG组之间差异无统计学意义,P>0.05。(4)ATG5蛋白水平在AG组的表达低于IG组和HC组,P均<0.05,IG组和HC组之间差异无统计学意义,P>0.05。(5)LC3B蛋白水平在AG组的表达高于IG组和HC组,P均<0.05,在IG组的表达水平高于HC组,P<0.05。4.自噬基因与研究对象临床指标的相关性分析:(1)Beclin 1的表达水平与白细胞、中性粒细胞呈负相关,与淋巴细胞呈正相关;(2)ATG16L1与白细胞、血尿酸、血肌酐、球蛋白、甘油三酯、胆固醇、超敏C反应蛋白、低密度脂蛋白胆固醇呈负相关,与高密度脂蛋白胆固醇呈正相关;(3)ATG12与低密度脂蛋胆固醇白呈负相关;(4)ATG5与球蛋白、低密度脂蛋白胆固醇呈负相关;(5)LC3B与临床指标之间无相关性。结论:1.与健康对照组相比,痛风病人除炎症指标升高以外,同时还易伴发高血压、糖尿病、高脂血症等疾病。2.自噬功能被抑制可能为痛风性关节炎急性发作的机制之一,而自噬功能再度活化是急性痛风性关节炎自发缓解的机制。3.Beclin1、ATG16、ATG12、ATG5在完成自噬体的启动与延伸后,可能通过泛素化方式被自噬溶酶体降解,也可能是被相应microRNAs调控的结果,尚待进一步研究。4.Beclin1、ATG16L1、ATG5可能参与了 AG患者发病机制中的炎症调节,而且ATG16L1还可能参与了 AG患者的脂代谢调节。