早孕因子(early pregnancy factor,EPF)是一种与哺乳动物妊娠有关的蛋白,是在哺乳动物受精后最早可在血清中检测出的一种免疫抑制因子和生长因子。研究表明,卵母细胞在受精后产生的一系列反应会使早孕因子产生变化,因此早孕因子可以作为超早孕检测的指标。由于机体在流产之前都会有早孕因子下降的趋势,所以早孕因子在超早孕检测及流产预测和诊断方面有着重要的应用。本试验旨在通过对阴道采集物中早孕因子标记物的筛选与鉴定,选择一种含量稳定且变化有规律的早孕因子对家畜进行超早孕检测。选取身体况相同的80只初产母羊进行同期发情处理,注射氯前列酸钠后48~72h进行试情,随机选取30只发情时间相同的母羊进行配种。在配种后第14~17 d用试情公羊对挑选的母羊进行试情,试情结果为有6只母羊再次发情,将这6只母羊判定为返情母羊,其余24只母羊则为妊娠母羊。将24只妊娠母羊分为两组分别是第Ⅰ组和第Ⅱ组,第Ⅰ组作为返情母羊的对照组,羊只数量应与返情母羊数量一致,因此第Ⅰ组的母羊数量为6只,则第Ⅱ组母羊的数量为剩余的18只。将6只返情母羊分为第Ⅲ组返情组,用来和第Ⅰ组进行早孕因子基因mRNA表达量和孕酮含量的对比试验。对挑选的30只母羊在配种后的第0、5、10、13 d进行样本采集,后在第14 d试情分组。分组后,对第Ⅰ组和第Ⅲ组的母羊在配种后第15、20、25 d进行样本采集,对第Ⅱ组的母羊在配种后第16、19、25 d进行样本采集。根据JAK/STAT信息转导通路和孕酮变化对与其相关的早孕因子进行筛选。采样结束后利用绵羊孕酮(PROG)酶联免疫分析试剂盒将妊娠母羊和返情母羊阴道采集物中不同时期孕酮含量作出对比,利用qPCR方法检测早孕因子相关基因Cox1、Cox2、Jak2、Stat1、Isg15、Mx1、Oas1的mRNA的表达,利用Western Blot检测早孕因子相关基因Cox1、Jak2、Mx1、Isg15的蛋白的表达。结果表明:(1)通过孕酮含量变化与Cox2基因表达量变化的比较发现,在配种15 d前两者间拮抗作用不明显,在配种15 d后两者间拮抗作用明显。(2)IFNτ刺激基因Isg15的表达量对绵羊早孕鉴定有重要意义,可作为早孕诊断检测的指标。上述结果揭示:在所选取的7种与早孕因子相关的基因中,Isg15是最适合做超早孕检测的。