论文部分内容阅读
【目的】(1)探讨携带qac(A/B)基因的金黄色葡萄球菌、MRSA、MSSA对碘伏、戊二醛两种消毒剂的抗性;(2)探讨金黄色葡萄球菌携带qac(A/B)基因与其对碘伏、戊二醛抗性的关系;(3)探讨金黄色葡萄球菌对抗生素耐药总程度与消毒剂抗性的关系;(4)探讨在亚致死剂量诱导作用下金黄色葡萄球菌对碘伏、戊二醛抗性变化趋势。【方法】一、实验方法以临床连续收集的103株金黄色葡萄球菌为实验菌株,进行最小抑菌浓度测定、最小杀菌浓度测定、悬液定量杀灭实验:运用PCR法对每株细菌进行qac(A/B)基因的检测;采用区组随机法将qac(A/B)基因为阳性的金黄色葡萄球菌随机分成两组,首先随机消除一组菌株的qac(A/B)基因,然后再消除另外一组菌株的qac(A/B)基因,并进行前后比较;亚致死剂量诱导金黄色葡萄球菌ATCC6538 30代,观察其对碘伏、戊二醛抗性的变化趋势。二、统计方法采用SPSS15.0软件,对抗性率数据进行卡方检验,对最小抑菌实验、最小杀菌实验数据进行多个独立样本的秩和检验(K-W检验);对悬液定量杀菌实验数据进行重复测量设计的方差分析(协方差分析);对抗生素耐药总程度和杀灭对数值数据进行秩相关(spearman相关)。【结果】一、标本情况共收集103株金黄色葡萄球菌,MRSA 67株(65.05%),MSSA 36株(34.95%)。8株金黄色葡萄球菌携带qac(A/B)基因,阳性率为7.67%。二、碘伏对金黄色葡萄球菌杀菌作用(一)碘伏对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度碘伏对36株MSSA最小抑菌浓度:4株MIC值为25.0mg/l、27株MIC值为37.5mg/l、5株MIC值为50.0mg/l,以碘伏对金黄色葡萄球菌ATCC6538MIC值为判断标准,抗性率为13.8%;对59株MRSA最小抑菌浓度:3株MIC值为37.5mg/l、19株MIC值为50.0mg/l、13株MIC值为62.5mg/l、19株MIC值为75.0mg/l、5株MIC值为>75.0mg/l,抗性率为94.9%;对8株携带qac(A/B)基因的金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度:4株MIC值为75.0mg/l、4株MIC值为>75.0mg/l,抗性率为100.0%。3组的最小抑菌浓度差别具有统计学意义(H=66.785,P<0.05)。进一步采用两两比较法(Bonferroni法)作菌数间的两两比较,P值均小于0.017。(二)碘伏对金黄色葡萄球菌最小杀菌浓度碘伏对36株MSSA最小杀菌浓度:2株MBC值为25.0mg/l、14株MBC值为37.5mg/l、18株MBC值为50.0mg/l、2株MBC值为62.5mg/l,以碘伏对金黄色葡萄球菌ATCC6538MBC值为判断标准,抗性率为5.5%;对59株MRSA最小杀菌浓度:10株MBC值为50.0mg/1、15株MBC值为62.5mg/l、13株MBC值为75.0mg/l、21株MBC值为>75.0mg/l,抗性率为83.1%;对8株携带qac(A/B)基因的金黄色葡萄球菌最小杀菌浓度:8株MBC值为>75.0mg/l,抗性率为100%。3组的最小杀菌浓度差别具有统计学意义(H=63.589,P<0.05)。进一步采用两两比较法(Bonferroni法)作菌数间的两两比较,P值均小于0.017。(三)碘伏对金黄色葡萄球菌杀灭效果含有效碘40mg/l的碘伏对MSSA1、3、5、7分钟平均杀灭对数值分别为4.68±1.34、5.83±1.46、7.44±1.29、7.97±0.77;对MRSA1、3、5、7分钟平均杀灭对数值分别为3.34±0.73、4.24±0.66、5.02±0.79、5.91±0.98;对携带qac(A/B)基因的金黄色葡萄球菌1、3、5、7分钟平均杀灭对数值分别为2.29±0.12、3.11±0.24、3.59±0.50、4.24±0.53。3组平均杀灭对数值差别具有统计学意义(F=92.426,P<0.05)。进一步采用两两比较法(LSD法)作菌数间的两两比较,P值均小于0.05。(四)碘伏对质粒消除前后的金黄色葡萄球菌杀灭效果对质粒消除前的金黄色葡萄球菌1、3、5、7分钟平均杀灭对数值分别为2.29±0.12、3.11±0.24、3.59±0.50、4.24±0.53;对消除质粒后的金黄色葡萄球菌1、3、5、7分钟平均杀灭对数值分别为3.85±0.15、4.93±0.32、5.76±0.49、6.45±0.61。两组平均杀灭对数值差别具有统计学意义(F=164.153,P<0.05)。(五)碘伏对金黄色葡萄球菌杀灭对数值与其对抗生素耐药总程度相关性碘伏作用1分钟对金黄色葡萄球菌杀灭对数值与其对抗生素耐药总程度秩相关系数为-0.704,具有统计学意义(P<0.05);碘伏作用3分钟对金黄色葡萄球菌杀灭对数值与其对抗生素耐药总程度秩相关系数为-0.753,具有统计学意义(P<0.05);碘伏作用5分钟对金黄色葡萄球菌杀灭对数值与其对抗生素耐药总程度秩相关系数为-0.761,具有统计学意义(P<0.05);碘伏作用7分钟对金黄色葡萄球菌杀灭对数值与其对抗生素耐药总程度秩相关系数为-0.664,具有统计学意义(P<0.05)。(六)碘伏对亚致死剂量的作用下连续消毒30代(诱导作用)金黄色葡萄球菌ATCC6538的结果ATCC1MIC值为37.5mg/l、ATCC15MIC值为62.5mg/l、ATCC30MIC值为75.0mg/l;ATCC1MBC值为50.0mg/l、ATCC15MBC值为75.0mg/l、ATCC30MBC值为>75.0mg/l。三、戊二醛对金黄色葡萄球菌的杀菌作用(一)戊二醛对金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度戊二醛对36株MSSA最小抑菌浓度:5株MIC值为31.25mg/l、23株MIC值为62.50mg/l、8株MIC值为125.00mg/l,与金黄色葡萄球菌ATCC6538MIC值相比抗性率22.2%;对59株MRSA最小抑菌浓度:10株MIC值为62.50mg/l、43株MIC值为125.00mg/l、6株MIC值为250.00mg/l,抗性率83.1%。对8株携带qac(A/B)基因的金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度:8株MIC值为250.00mg/l,抗性率100%。3组的最小抑菌浓度差别具有统计学意义(H=52.280,P<0.05)。进一步采用两两比较法(Bonferroni法)作菌数间的两两比较,P值均小于0.017。(二)戊二醛对金黄色葡萄球菌最小杀菌浓度戊二醛对36株MSSA最小杀菌浓度:7株MBC值为62.50mg/l、29株MBC值为125.00mg/l,与金黄色葡萄球菌ATCC6538MBC值相比抗性率0.0%;对59株MRSA最小杀菌浓度:4株MBC值为62.50mg/l、49株MBC值为125.00mg/l、6株MBC值为250.00mg/l,抗性率10.2%。对8株携带qac(A/B)基因的金黄色葡萄球菌最小杀菌浓度:8株MBC值为250.00mg/l,抗性率为100%。3组的最小抑菌浓度差别具有统计学意义(H=38.975,P<0.05)。进一步采用两两比较法(Bonferroni法)作菌数间的两两比较,P值均小于0.017。(三)戊二醛对金黄色葡萄球菌杀灭效果戊二醛(80mg/l)对MSSA 1、3、5、7分钟平均杀灭对数值分别为3.74±107、5.51±1.38、7.07±1.23、8.28±0.19;对MRSA 1、3、5、7分钟平均杀灭对数值分别为2.67±0.59、4.01±0.63、4.77±0.78、8.36±0.12;对携带qac(A/B)基因的金黄色葡萄球菌1、3、5、7分钟平均杀灭对数值分别为1.83±0.09、2.93±0.23、3.41±0.05、8.51±0.05。3组平均杀灭对数值差别具有统计学意义(F=70.112,P<0.05)。进一步采用两两比较法(LSD法)作菌数间的两两表较,P值均小于0.05。(四)戊二醛对质粒消除前后的金黄色葡萄球菌杀灭效果对质粒消除前的金黄色葡萄球菌1、3、5、7分钟平均杀灭对数值分别为1.83±0.09、2.93±0.23、3.41±0.05、8.51±0.05;对消除质粒后的金黄色葡萄球菌1、3、5、7分钟平均杀灭对数值分别为2.71±0.13、4.11±0.07、4.72±0.29、8.64±0.15。两组平均杀灭对数值差别具有统计学意义(F=878.401,P<0.05)。(五)戊二醛对金黄色葡萄球菌杀灭对数值与其对抗生素耐药总程度相关性戊二醛1分钟时对金黄色葡萄球菌杀灭对数值与其对抗生素的耐药总程度秩相关系数为-0.701,具有统计学意义(P<0.05);戊二醛3分钟时对金黄色葡萄球菌杀灭对数值与其对抗生素的耐药总程度秩相关系数为-0.746,具有统计学意义(P<0.05);戊二醛5分钟时对金黄色葡萄球菌杀灭对数值与其对抗生素的耐药总程度秩相关系数为-0.771,具有统计学意义(P<0.05);戊二醛7分钟时对金黄色葡萄球菌杀灭对数值与其对抗生素的耐药总程度秩相关系数为0.276,不具有统计学意义(P>0.05)。(六)戊二醛对亚致死剂量的作用下连续消毒30代(诱导作用)金黄色葡萄球菌ATCC6538的结果ATCC1MIC值为62.50mg/l、ATCC15MIC值为125.00mg/l、ATCC30MIC值为125.00mg/l;ATCC1MBC值为125.00mg/l、ATCC15MBC值为125.00mg/l、ATCC30MBC值为250.00mg/l。【结论】(1)携带qac(A/B)基因的金黄色葡萄球菌、MRSA、MSSA对碘伏、戊二醛抗性不同,携带qac(A/B)基因的金黄色葡萄球菌对两种消毒剂抗性最强,MSSA最弱,MRSA居中;(2)携带qac(A/B)基因金黄的葡萄球菌对碘伏、戊二醛抗性增强,qac(A/B)基因是耐消毒剂基因;(3)金黄色葡萄球菌对抗生素耐药总程度与对碘伏、戊二醛抗性成正相关;(4)亚致死剂量诱导作用可导致金黄色葡萄球菌ATCC6538对碘伏、戊二醛抗性增加。