球虫是对养鸡业危害最大的病原体之一。尽管“以饲料厂为中心的药物预防体系”对球虫病控制和集约化养鸡生产发展发挥了不可或缺的保障作用,但随着鸡球虫抗药性的普遍产生,迫切需要寻找新的药物作用靶标分子,开发新型药物。其它寄生原虫的研究业已表明,组蛋白去乙酰化酶(HDACs)是颇具应用前景的药物靶标。HDAC3是I型HDACs家族的成员之一,主要作用于H2A、H4组蛋白等,是重要的药物靶标。对柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)的HDAC3(EtHDAC3)的研究不仅能发现其在球虫生活史调控机制中的作用,还可为研制新型抗球虫药、新型疫苗奠定理论基础。本研究通过生物信息学方法预测EtHDAC3基因并设计引物,以E. tenella广东株裂殖子总RNA为模板,用RT-PCR方法获得其序列,结果显示克隆的序列由1200个核苷酸组成,编码399个氨基酸。通过生物信息学方法对E.tenella进行结构和功能分析,结果显示EtHDAC3具有完整的I型HDACs的结构域,并与其它顶复门生物具有高度保守性,序列相似性达到90%左右。本研究以原核表达载体pMAL-C2X构建重组质粒pMAL-C2X-EtHDAC3,经双酶切和测序鉴定后转化E.coli transetta,进行IPTG诱导表达。结果显示重组质粒在大肠杆菌中进行可溶性表达,且在16℃时表达最好。IPTG浓度在0.3mmol/L～1.2mmol/L变化时,对EtHDAC3的表达量没有影响。利用实时荧光定量PCR技术,以E. tenella β-actin为内参基因,分析了E. tenella不同发育阶段EtHDAC3基因的表达水平,结果显示EtHDAC3mRNA水平在孢子化7h时达到最高峰,在其他时期表达量很少。使用Swiss-Model对EtHDAC3和鸡的HDAC3(ChHDAC3)进行同源模建,比较分析EtHDAC3和ChHDAC3的活性位点。利用Autodock4.2进行分子对接,研究抑制剂Apicidin与EtHDAC3、ChHDAC3结合模式的差异。构建的EtHDAC3和ChHDAC3的三维模型显示其均由八个串联的B折叠和11个a螺旋组成,其活性位点高度保守,仅在表面识别区有一个氨基酸的差异。分子对接分析结果显示,Apicidin与EtHDAC3有更低的结合能,提示Apicidin对EtHDAC3具有更强的抑制活性和选择性。