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背景与目的近年来,受生育问题困扰的夫妇人数逐年上升,不孕不育症已成为世界广泛关注的医学难题和社会问题,不育病例中的男性因素累计占总病例的50%。随着科技的发展,辅助生殖技术(assisted reproductive technology,ART)帮助众多不孕夫妇解决了生育问题。胚胎质量是影响ART成功率的重要因素,而精子DNA作为受精卵细胞核一半遗传物质的提供者,对胚胎的形成和发育至关重要。精子DNA的完整性会影响到精子受精能力,胚胎发育潜能,胎儿生长发育情况,子代健康等。轻度DNA损伤时,受精后的卵母细胞可启动有限的DNA修复程序进行修复,但在有害因素干扰下精子DNA碎片大量产生,超出卵母细胞修复能力,可能会激活凋亡通路诱导胚胎凋亡。精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)可测定精子DNA损伤程度,具有较好的稳定性,可有效反映精子DNA的完整性。国内外均有研究表明,精子DFI与女性自然受孕率下降以及男性不育有较强的关联性,不育男性的DFI明显高于可育男性,25-40%的不育男性常规精液特征显示正常,但DFI高达20-30%。精子DFI超过正常阈值,男性生育力下降,因此,国内许多生殖中心已将DFI作为评估精液质量的一个重要指标。获得优质精子用于受精是形成优质胚胎的前提条件,禁欲时间对于确保成功自然和辅助妊娠所需精子的数量和质量至关重要,但不同禁欲天数对精子DNA碎片的影响报道并不一致,对于具体禁欲天数范围对精子DFI的影响,研究尚不充足,本文拟对此进行进一步研究。若禁欲天数影响精子DFI水平,可通过干预禁欲时间尽量取得碎片较少的精液标本用以辅助生殖过程中,提高辅助生殖技术成功率。已有研究均证实了温度和放置时间会对精子DNA碎片率产生不利影响。辅助生殖过程中,精液需经体外优化处理后用于受精,体外操作处理流程对精子受精能力的影响不可忽视。为了 了解温度和放置时间对精子DNA碎片的影响,本文拟探究优化后精液在0-6h内置于室温(24± 1℃)和37℃条件下精子DNA碎片的变化,探讨精子放置的最佳条件和时间,以减少精子DNA碎片的产生,从而改善IVF-ET助孕结局。资料与方法选取2019年02月至2019年07月在郑州大学第二附属医院生殖医学中心就诊的824例男性患者的临床资料,根据禁欲天数分为G1(<2d)、G2(3-5d)、G3(6-7d)、G4(>7d)4组,分别比较各组DFI、前向运动、浓度等指标。随机选取同时间段就诊男性患者正常精液标本30例,均在禁欲2-7天后手淫法留取,测定选取精液样本的DFI值。经精液优化处理后再次测定精子DFI值,然后分成两份,分别置于室温(24± 1℃)和37℃培养箱内,于2h、4h、6h检测DFI值,分组:A组:精液优化处理前DFI值;B0/C0组:精液优化处理后立即测定的DFI值;B2组:室温下2h DFI值;B4组:室温下4h DFI值;B6组:室温下 6h DFI 值;C2 组:37℃2h DFI 值;C4 组:37℃4h DFI 值;C6 组:37℃6h DFI值;比较相关各组的DFI值变化,探究放置时间和温度对精子DFI的影响。结果1.不同禁欲天数精液分析参数的变化:不同禁欲天数精液DFI的变化规律为:G4组(禁欲>7天)>G3组(禁欲6-7天)>G2组(禁欲3-5天)>G1组(禁欲>2天),其中G4组、G3组明显高于G1组、G2组,差异具有统计学意义,P<0.05;不同禁欲天数精子前向运动比例依次为:G2组>G4组>G3组>G1组,各组间比较差异无统计学意义,P>0.05;不同禁欲天数精子浓度依次为:G4组>G3组>G2组>G1组,其中G4组明显高于G1组,差异具有统计学意义,P<0.05。2.密度梯度离心加上游法处理后精子DFI明显降低,差异有统计学意义,P<0.05。3.精子优化后放置在不同温度下及不同时间精子DFI的变化:室温下放置6h组>放置4h组>放置2h组>放置0h组(即B6组>B4组>B2组>B0组),其中B6组明显高于B0组,差异有统计学意义,P<0.05。37℃下放置6h组>放置4h组>放置2h组>放置0h组(即C6组>C4组>C2组>C0组),各组间比较差异均有统计学意义,P<0.05。4.不同温度对精子DFI的影响:同一份优化后的精子相同时间下37℃培养箱中DFI均大于室温下,即C2组>B2组,C4组>B4组、C6组>B6组,P<0.05。结论1.禁欲3-5天精子质量最佳;2.精液优化处理后体外受精前精子在体外放置的时间应<2h,补救ICSI时,应尽量在精液优化处理后6h内进行;3.精液优化处理后受精前放置在室温下比37℃培养箱更佳。