基于电致化学发光技术的生物传感器用于检测β-淀粉样蛋白的研究

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阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD)是一种典型的神经性疾病,发病主要在中老年人身上。其临床症状主要是记忆障碍、执行功能的障碍以及语言和方向能力降低等。近年来,研究表明β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein,Aβ)可作为阿尔茨海默症的标记物,且Aβ与多种蛋白质和离子都有相互作用。Aβ的聚集对阿尔茨海默症的病人有不可逆的损伤,实现对Aβ的早期检测显得尤为重要。随着生物传感器的不断发展,多种传感器被应用于Aβ的检测。本文中,构建了三种基于电致化学发光(Electrochemiluminescence,ECL)的生物传感,通过Aβ适体与Aβ的特异性识别,实现了对Aβ的定量检测。主要内容如下:1、HSA/g-C3N4作为电致化学发光探针检测β-淀粉样蛋白采用一步煅烧法制备了ECL性能良好的类石墨相-碳化氮二维纳米材料(g-C3N4),经1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺活化后,g-C3N4与人血清白蛋白(Human Serum Albumin,HSA)复合,得到HSA/g-C3N4复合材料。利用Aβ与HSA的结合作用,将HSA/g-C3N4与不同浓度的Aβ孵育,形成Aβ/HSA/g-C3N4。同时将巯基修饰的Aβ适体固定在金电极表面,通过适体(aptamer)与靶标分子的特异性识别,可以将Aβ/HSA/g-C3N4捕获到电极上。在共反应剂K2S2O8存在下,该传感器实现了对Aβ的ECL灵敏检测。研究表明,在10f M到100 n M范围内,ECL强度与Aβ浓度呈良好的线性关系,检出限低至7.2 f M。并且该传感器具有较好的特异性和较高的灵敏度。2、基于g-C3N4-heme的比率型电致化学发光传感器检测β-淀粉蛋白通过水热法合成了碳化氮-氯化血红素(g-C3N4-heme)复合物,以其作为信号分子,并以鲁米诺(luminol)作为内标分子,利用heme与Aβ的相互作用以及适体与Aβ的特异性结合,构建了比率型生物传感器实现了Aβ的定量检测。首先,将luminol负载在电极上,电聚合聚苯胺(PANI)薄膜改良其电化学性能并保护luminol不脱落。通过金纳米颗粒将巯基修饰的Aβ适体修饰到传感界面,将g-C3N4-heme-Aβ复合物捕获到传感界面,从而实现Aβ的灵敏检测。研究表明,在Aβ浓度10 f M到10 n M的范围内,ECL信号与Aβ的浓度呈现良好的线性关系,检测限低至4.2 f M,且该生物传感器具有较高的灵敏度和良好的选择性。3、基于ECL-RET的抗污染电致化学发光传感器检测β-淀粉蛋白构建了一种基于电致化学发光共振能量转移(ECL-RET)的抗污染生物传感器。由于g-C3N4和硫化镉量子点(Cd S QDs)之间能发生共振能量转移,从而实现ECL增强检测目标分子信。具体来讲,将g-C3N4纳米片负载在电极上,电沉积PANI薄膜保护g-C3N4纳米片并改善电极的电化学性能。通过酰胺键将羧基修饰的具有识别Aβ片段(KKLVFF)的抗污染多肽结合到传感界面。同时,将氨基修饰的Aβ适体与表面有丰富羧基的Cd S QDs复合形成aptamer-Cd S QDs。利用多肽与Aβ特异性结合将aptamer-Cd S QDs捕获到电极表面,从而实现了对Aβ的ECL灵敏检测。实验表明,Aβ浓度的对数与ECL强度在0.1 p M到100 n M范围内呈良好的线性关系,检测限低至16.1 f M。
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