【摘 要】
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背景与目的:膀胱癌是全球发病率排名第十的泌尿系统恶性上皮肿瘤,其发病率存在性别差异,在男性肿瘤患者中排名第七,在女性肿瘤患者中排名第十七。膀胱癌的发生发展离不开原癌基因的激活和抑癌基因的失活,这些基因的改变导致膀胱癌细胞异常增殖,并侵袭到身体的其它部位。近年来,随着对膀胱癌的研究不断加深,人们对膀胱癌的认识不断提高,治疗手段也在进步。但是,膀胱癌治疗后容易复发的问题导致预后不良。因此,研究膀胱癌增
【基金项目】
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国家自然科学基金81802941；
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背景与目的:膀胱癌是全球发病率排名第十的泌尿系统恶性上皮肿瘤,其发病率存在性别差异,在男性肿瘤患者中排名第七,在女性肿瘤患者中排名第十七。膀胱癌的发生发展离不开原癌基因的激活和抑癌基因的失活,这些基因的改变导致膀胱癌细胞异常增殖,并侵袭到身体的其它部位。近年来,随着对膀胱癌的研究不断加深,人们对膀胱癌的认识不断提高,治疗手段也在进步。但是,膀胱癌治疗后容易复发的问题导致预后不良。因此,研究膀胱癌增殖机制,有重要的基础和临床意义,有利于我们找到新的治疗方法。研究表明,核内不均一核糖核蛋白 F（Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein F,hnRNP-F）在多种恶性肿瘤中表达升高,起到促进肿瘤进展的作用。在前面的研究中,我们证实,在人膀胱癌组织中,hnRNP-F的mRNA水平和蛋白水平都表达升高,且与患者预后不良相关;体内外实验证明hnRNP-F可促进膀胱癌细胞的侵袭能力、迁移能力以及EMT过程。本研究课题以前期研究为基础,拟探讨hnRNP-F蛋白对人膀胱癌细胞增殖能力的影响,并探究调控hnRNP-F表达的分子机制。第一章:HnRNP-F促进膀胱癌细胞增殖研究方法:构建稳定干扰hnRNP-F的膀胱癌细胞株,采用CCK8增殖实验、平板克隆实验检测hnRNP-F对膀胱癌细胞增殖能力的影响,采用流式细胞术检测hnRNP-F对膀胱癌细胞周期分布的影响。结果:HnRNP-F能促进膀胱癌细胞的增殖;hnRNP-F能促进膀胱癌细胞周期G1/S期转换,加快细胞周期进程。第二章:生物信息学预测hnRNP-F与PI3K/AKT相关研究方法:从TCGA数据库下载403例膀胱癌患者的资料,并用生物信息学方法富集分析与hnRNP-F相关的基因和信号通路。采用药物半数致死量实验确定PI3K/AKT通路抑制剂LY294002在膀胱癌细胞中的最佳剂量,用蛋白质印迹方法检测膀胱癌细胞中hnRNP-F与PI3K/AKT通路蛋白的表达关系,确定LY294002在膀胱癌细胞中的作用效果。结果:HnRNP-F与PI3K/AKT通路高度相关。HnRNP-F无法影响PI3K/AKT通路蛋白的表达,PI3K/AKT通路蛋白可以促进hnRNP-F表达。第三章:PI3K/AKT调控膀胱癌细胞中hnRNP-F表达研究方法:用生物信息学法预测出可能作用于hnRNP-F的转录因子。采用染色质免疫沉淀技术实验（ChIP）检测出膀胱癌细胞中FOXO1结合hnRNP-F启动子区域。构建hnRNP-F启动子区域全长质粒,用双荧光素酶报告实验确定FOXO1对hnRNP-F的作用。构建并转染干扰hnRNP-F和FOXO1质粒,采用CCK8增殖实验、平板克隆实验检测使用LY294002后FOXO1对膀胱癌细胞增殖能力的影响,采用流式细胞术检测使用LY294002后FOXO1对膀胱癌细胞周期的影响。结果:在膀胱癌细胞中,FOXO1结合在hnRNP-F的启动子上并抑制其转录;在膀胱癌细胞中,PI3K/AKT通过FOXO1调控hnRNP-F蛋白表达从而促进细胞周期进程,促进细胞增殖;干扰FOXO1蛋白表达可以恢复PI3K/AKT抑制剂调控hnRNP-F的抑制膀胱癌细胞周期进程和增殖作用。结论:PI3K/AKT通过FOXO1调控hnRNP-F表达促进膀胱癌细胞增殖。
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