【摘 要】
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硬脂酸、油酸、亚麻酸、反10顺12共轭亚油酸、顺9反11共轭亚油酸等十八碳脂肪酸通过在动物日粮中添加,对泌乳性能和脂肪酸合成相关基因产生影响。本研究的主要目的是探究t10c12-CLA通过固醇元件结合蛋白1（SREBP1）调控山羊乳腺上皮细胞乳成分代谢的分子机制。首先采集了奶山羊乳腺组织,分离得到乳腺上皮细胞。使用十八碳脂肪酸对乳腺上皮细胞进行处理,利用转录组测序技术对差异基因和显著富集的信号通路
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硬脂酸、油酸、亚麻酸、反10顺12共轭亚油酸、顺9反11共轭亚油酸等十八碳脂肪酸通过在动物日粮中添加,对泌乳性能和脂肪酸合成相关基因产生影响。本研究的主要目的是探究t10c12-CLA通过固醇元件结合蛋白1（SREBP1）调控山羊乳腺上皮细胞乳成分代谢的分子机制。首先采集了奶山羊乳腺组织,分离得到乳腺上皮细胞。使用十八碳脂肪酸对乳腺上皮细胞进行处理,利用转录组测序技术对差异基因和显著富集的信号通路进行分析,对蛋白表达水平进行检测以及与信号通路抑制剂相结合对细胞信号转导进行研究,获得如下结果:1.对体外培养的乳腺上皮细胞（GMECs）分别添加五种浓度为100μM的十八碳脂肪酸（硬脂酸、油酸、亚麻酸、反10顺12共轭亚油酸、顺9反11共轭亚油酸）,处理72h后发现,t10c12-CLA对SREBP1有显著的抑制作用（P<0.05）。随后用100μM t10c12-CLA处理GMECs并测序分析后发现,与对照组之间存在差异表达的基因数量有49个。KEGG富集分析发现,与糖脂代谢密切相关的AMPK信号通路和多个与脂代谢相关的基因被显著富集。2.在GMECs中添加100μM t10c12-CLA处理12h、24h、72h后发现,处理72h时AMPK磷酸化水平显著上调（P<0.05）,m TOR磷酸化水平显著下调（P<0.05）SREBP1蛋白表达被显著抑制（P<0.01）。之后引入AMPK抑制剂进一步发现,t10c12-CLA通过激活AMPK抑制了SREBP1的表达。3.在GMECs中单独或混合添加t10c12-CLA、AMPK抑制剂Dorsomorphin后发现,GMECs中的β-酪蛋白表达无影响（P>0.05）;脂滴减少（P<0.01）,脂肪酸中C16（P<0.01）和C18（P<0.05）含量降低,脂肪酸代谢基因被抑制;葡萄糖转运相关基因GLUT8的m RNA表达水平被下调（P<0.05）。综上,t10c12-CLA在调控奶山羊乳成分代谢过程中起到了非常重要的作用,能够使羊奶中脂肪酸含量明显降低,还参与糖代谢,以上结果可能是通过t10c12-CLA激活AMPK进而影响SREBP1表达造成的。
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