目的:
　　 采用离体培养SD(Sprague-Dawley)大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonaryarterial smooth muscle cells,PASMCs),研究姜黄素(curcumin,cur)对低O2肺动脉平滑肌细胞增殖和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的影响。
　　 方法:
　　 用25cm2无菌培养瓶培养SD大鼠离体肺动脉平滑肌细胞,将同源同代细胞随机分为5组,分别为正常对照组(N组),24小时低O2对照组(0组),24小时低O2培养加入5μmol/L姜黄素组(Ⅰ组),24小时低O2培养加入10μmol/L姜黄素组(Ⅱ组),24小时低O2培养加入25μmol/L姜黄素组(Ⅲ组),低氧氧浓度为5％,各组DMSO浓度均为0.01％。采用图像分析、免疫细胞化学法、CCK-8(cell counting kit-8)、实时荧光定量多聚酶链反应(real-timequantitative PCR,RT q-PCR)、酶联免疫吸附试验(enzyme-linkedimmunosorbent assay,ELISA)等方法,分别观察培养的肺动脉平滑肌细胞的形态,测定α-肌动蛋白(α-SM actin)鉴定平滑肌细胞,测定OPN表达及其基因表达水平,其中CCK-8法检测各组吸光度(Absorbance,A)值大小作为细胞相对数的比较,并应用统计软件SPSS16.0对实验数据进行分析。
　　 结果:
　　 1、CCK-8法测定各组肺动脉平滑肌细胞吸光度值(A值),测定结果示,0组较N组细胞增殖有显著性差异(P<0.01),提示低氧刺激肺动脉平滑肌细胞增殖。Ⅰ～Ⅲ组较0组细胞增殖减少(P<0.01),提示姜黄素对低氧刺激肺动脉平滑肌细胞增殖有抑制作用,不同浓度姜黄素之间的比较显示,姜黄素10μmol/L较5μmol/L更能抑制低氧下肺动脉平滑肌细胞增殖作用(P<0.05),25μmol/L姜黄素抑制低氧刺激细胞增殖作用较5μmol/L、10μmol/L,强(P<0.01)。提示姜黄素从5μmol/L开始,随着浓度的增高,对低氧下肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用增强。
　　 2、Elisa测定OPN相对表达量结果显示,0组较对照组(N组)骨桥蛋白的相对表达量增加(P<0.01),提示低氧能刺激骨桥蛋白相对表达量增高。Ⅰ～Ⅲ组OPN。相对表达量较0组减少(P均<0.01),表明姜黄素有抑制低氧肺动脉平滑肌细胞OPN表达的作用。其中2.5μmol/L姜黄素与其他浓度之间比较,25μmol/L姜黄素较5μmol/L更能抑制低氧OPN相对表达量增加(P<0.01),25μmol/L姜黄素较10μmol/L OPN相对表达量的平均值减少,但两者比较无统计学意义(P>0.05),提示姜黄素从5μmol/L开始,对低氧刺激OPN相对表达量增高随着浓度的增高抑制作用增强。
　　 3、实时荧光定量PCR测定OPN mRNA相对表达量结果显示,正常对照组(N组)与低氧未加药组(0组)比较,低氧刺激能显著提高骨桥蛋白mRNA相对表达量(P<0.01)。Ⅰ～Ⅲ组OPN mRNA相对表达水平较0组减少(均P<0.05),提示姜黄素对低氧OPN mRNA相对表达水平有抑制作用。其中姜黄素25μmol/L(Ⅲ组)较5μmol/L(Ⅰ组)能明显降低低氧下平滑肌细胞骨桥蛋白mR_NA的相对表达量(P<0.05),25μmol/L较10μmol/LOPN mRNA相对表达量均数及变化倍数均数降低,但两者比较无显著性差异(P>0.05),提示姜黄素从5μmol/L开始具有抑制低氧刺激OPN mRNA相对表达量增高的作用,并呈浓度依赖性增高。
　　 4、对CCK-8测定各组肺动脉平滑肌细胞吸光度平均值与OPN相对表达量进行Pearson直线相关分析,r=0.807,P<0.001,有显著性差异,提示肺动脉平滑肌细胞增殖与OPN相对表达量两者之间存在正相关。
　　 结论:
　　 1、姜黄素可抑制低O2离体大鼠肺动脉平滑肌细胞的增殖。
　　 2、姜黄素抑制OPN及其基因表达可能是其抑制低O2肺动脉平滑肌细胞增殖的重要机制。