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[目的]
观察活血、行气和补气三治法对心梗大鼠用药2周后心脏形态、重量、舒缩功能变化的影响,探讨PKC、ERK1、ERK2蛋白在心室重构过程中的作用及中药的影响,进一步阐明活血、行气和补气三治法抗大鼠心梗后心室重构的信号转导机制,比较三治法在心梗大鼠的治疗中如何恰当组合才能发挥更好疗效,为科学组方用药提供客观依据,切实提高中药临床疗效。
[方法]
SD雄性大鼠160只,采用左冠状动脉前降支结扎法建立大鼠心血瘀阻证心梗模型,术后第二天存活大鼠纳入实验。随机分组:假手术组(10只),模型组(15只),治疗组9组(各15只)。治疗组每日中药水煎溶液灌胃(10g/kg·d,每日一次,持续2周),模型组和假手术组每日灌胃(相同剂量的生理盐水)。观察一般情况至术后2周,行血流动力学检测大鼠心功能;电子天平称量大鼠体重及左心室重量,计算左室重量指数(LVWI);心肌石蜡切片标本行苏木精-伊红染色;大鼠左室交界区心肌组织行透射电镜观察;Western Blot法检测各组大鼠左室非梗死区心肌组织PKC、ERK1、ERK2蛋白的含量。
[结果]
1.一般情况
术后1~7d,假手术组大鼠拱背站立体位基本消失,活动量、饮食明显增加;治疗组和模型组大鼠均表现为拱背站立的强迫体位,对外界刺激敏感,易激惹,活动量、饮食下降。术后8~14d,假手术组大鼠恢复术前状态;治疗组大鼠拱背站立体位基本消失,活动量、饮食增加,但有轻度的水肿;模型组大鼠拱背站立体位基本消失,活动量、饮食与治疗组大鼠相比较差。
2.各组大鼠血流动力学变化
模型组大鼠LVSP、±dp/dtmax明显低于假手术组(P<0.01VS假手术组),LVEDP则高于假手术组(P<0.01VS假手术组)。治疗组1、2、4组LVEDP低于模型组(P<0.05VS模型组),组间比较无差异(P>0.05)。治疗组1、2、4、5、6组+dp/dtmax高于模型组(P<0.01VS模型组),组间比较无差异(P>0.05)。治疗组1组-dp/dtmax高于模型组(P<0.05VS模型组),2、4、5、6组与模型组-dp/dtmax比较无差异(P>0.05VS模型组)。
3.各组大鼠左室重量指数(LVWI)的变化
模型组大鼠LVWI明显大于假手术组(P<0.01VS假手术组)。治疗组1、2、3、4、5、6、7、8组LVWI小于模型组(P<0.01VS模型组)。治疗组1、2、4组LVWI小于9组(P<0.05),1、2、4组组间比较无差异(P>0.05)。
4.心脏组织病理学及超微结构观察
假手术组大鼠心肌排列整齐,染色均匀一致;模型组大鼠肌丝排列紊乱且极度疏松,线粒体肿胀、脊紊乱或消失;治疗组大鼠肌丝排列较为有序。
5.各组大鼠心肌组织PKC、ERK1、ERK2蛋白表达水平的变化
5.1假手术组大鼠PKC、ERK1、ERK2表达量极少。模型组大鼠PKC、ERK1、ERK2表达量显著升高,大于假手术组(P<0.01VS假手术组)。
5.2治疗组1、2、4组PKC表达量与模型组比较显著降低(P<0.05VS模型组),1、2、4组组间比较没有差异(P>0.05)。
5.3治疗组1到9组ERK1表达量与模型组比较显著降低(P<0.01VS模型组)。治疗组1、2、4、5组间比较:1、2组ERK1与4、5组比较有显著差异(P<0.05),1组和2组比较没有差异(P>0.05),4组和5组比较没有差异(P>0.05)。
5.4治疗组1组至9组ERK2表达量与模型组比较显著降低(P<0.01VS模型组)。治疗组1、2、3、4、5、6、9组间比较:1、2、4、5、6组ERK2与3、9组比较有显著差异(P<0.05),1、2、4、5、6组组间比较没有差异(P>0.05),3组和9组组间比较没有差异(P>0.05)。
6.比较各组大鼠PKC、ERK1、ERK2蛋白之间的相关性以及与LVWI和血流动力学参数的相关性。
PKC与ERK1、ERK2显著相关(r=0.8795,r=0.7680);PKC与LVWI、LVEDP显著相关(r=0.7507,r=0.7760);ERK1与LVWI、LVEDP显著相关(r=0.6256,r=0.7233); ERK2与LVWI、LVEDP显著相关(r=0.8083,r=0.6189)。
[结论]
1.心梗大鼠心肌组织PKC、ERK1、ERK2蛋白的高表达现象,提示PKC、ERK1、ERK2蛋白可能参与了心梗后心室重构的过程。
2.中药治疗可改善大鼠心功能,保持心肌细胞正常形态结构,抑制心肌肥厚。
3.中药治疗能显著降低PKC、ERK1、ERK2蛋白的表达水平,分子机制可能为中药阻断了PKC-ERK1/ERK2这条信号通路介导的心室重构。
4.九组治疗组中活血、行气和补气三治法全剂量改善心梗气虚血瘀证大鼠心功能、左室重量指数及镜下结构的效果最好。全剂量活血药配合半剂量行气药和半剂量补气药,全剂量行气药配合半剂量活血药和半剂量补气药,两组的效果相当。